Детальный фармацевтический анализ производных птерина (фолатов): электрохимические методы количественного определения и фармакокинетические исследования

Представьте, что 15% мирового населения, по оценкам, страдает от дефицита фолиевой кислоты – одного из важнейших витаминов, чьи производные, известные как фолаты, играют центральную роль в поддержании жизни. Этот дефицит, часто остающийся незамеченным, может приводить к серьезным патологиям, от врожденных пороков развития до сердечно-сосудистых заболеваний. Понимание сложной химии, биологической роли, методов анализа и фармакокинетики этих соединений – не просто академический интерес, а насущная задача современной фармацевтики и медицины.

Настоящая работа представляет собой комплексное исследование производных птерина, сфокусированное на фолатах, как жизненно важных биомолекулах. Мы погрузимся в их фундаментальные химические и биологические аспекты, рассмотрим передовые электрохимические методы количественного определения, которые являются краеугольным камнем фармацевтического анализа, и глубоко проанализируем фармакокинетические особенности, включая механизмы абсорбции, распределения, метаболизма и экскреции. Особое внимание будет уделено сложным лекарственным взаимодействиям, которые могут влиять на эффективность и безопасность терапии, а также современным вызовам и перспективам в этой динамично развивающейся области. Цель работы — не только систематизировать существующие знания, но и пролить свет на те аспекты, которые часто остаются за кадром в стандартных академических обзорах, предлагая глубокое, многослойное понимание темы.

Химическая структура, классификация и биологическая роль производных птерина

Производные птерина – это не просто класс органических соединений; это целый мир молекул, чье влияние на живые системы простирается от окраски крыльев бабочек до тончайших механизмов регуляции генетической информации человека. Они являются ключевыми игроками в метаболизме и играют незаменимую роль в поддержании здоровья, а значит, их детальное изучение жизненно необходимо для понимания клеточных процессов.

Общая характеристика птеринов и птеридина

В основе этого многообразия лежит гетероциклическое соединение – птерин. По своей сути, птерины – это азотистые гетероциклические соединения, представляющие собой производные птеридина. Исторически они были впервые обнаружены как пигменты, придающие яркие цвета глазам и крыльям насекомых, откуда и пошло их название (от греч. «pteron» – крыло). Однако их биологическая роль оказалась куда более глубокой и многогранной.

Химическая структура птерина – это бициклическая система, образованная слиянием пиримидинового и пиразинового гетероциклических колец. Эта базовая структура, известная как птеридин, служит каркасом для множества биологически активных соединений. Собственно птерин характеризуется кето-группой в положении 4 и амино-группой в положении 2. Благодаря своей уникальной электронной структуре, птеридины могут выступать в роли кофакторов для ряда ферментов, обеспечивая перенос электронов и одноуглеродных фрагментов в метаболических реакциях. Среди наиболее известных производных птерина – группа витаминов, объединенных общим названием «фолиевая кислота» или, более широко, «фолаты».

Фолаты и фолиевая кислота: различия, химическая структура и метаболизм

Различия между терминами «фолат» и «фолиевая кислота» часто вызывают путаницу, но их понимание критически важно для оценки биологической активности и эффективности лекарственных препаратов.

Фолаты – это общее название для широкой группы природных соединений, являющихся производными витамина B₉. Они обнаруживаются в пищевых продуктах, особенно в листовых овощах (от лат. «folium» – лист), и уже частично активны, что позволяет им усваиваться организмом через сложный процесс в кишечнике. Эти естественные формы представлены в различных степенях восстановленности и содержат различное количество остатков глутаминовой кислоты.

Фолиевая кислота, или птероилмоноглутаминовая кислота, является синтетической формой витамина B₉. Именно эта форма чаще всего используется в витаминных препаратах и для обогащения пищевых продуктов. Ее химическое название – N-{4[(2-амино-4-гидрокси-6-птеридил)-метил]-амино}-бензоил-L(+)-глутаминовая кислота, а эмпирическая формула – C₁₉H₁₉N₇O₆. Это водорастворимый витамин, который в чистом виде представляет собой кристаллический порошок от желтого до оранжевого цвета.

Важно отметить, что синтетическая фолиевая кислота сама по себе биологически неактивна. Чтобы выполнять свои функции в организме, она должна пройти ряд метаболических превращений. Этот процесс начинается с восстановления фолиевой кислоты до тетрагидрофолата (ТГФ) при участии фермента дигидрофолатредуктазы. Затем ТГФ подвергается дальнейшим модификациям, образуя различные активные фолатные коферменты, включая 5-метилтетрагидрофолат (5-МТГФ), ключевой фермент, в синтезе которого участвует метилентетрагидрофолатредуктаза. Для людей с генетическими мутациями в гене, кодирующем метилентетрагидрофолатредуктазу, или с другими нарушениями фолатного цикла, применение активных форм фолатов, таких как L-метилфолат (5-МТГФ), является более эффективным, поскольку они усваиваются в неизмененном виде и не требуют сложных биохимических превращений.

Биологические функции фолатов и их роль в важнейших биохимических процессах

Роль фолатов в организме человека трудно переоценить. Они являются незаменимыми кофакторами для множества ферментативных реакций, играющих центральную роль в метаболизме одноуглеродных фрагментов.

• Метаболизм аминокислот: Фолатные коферменты критически важны для метаболизма аминокислот. Одним из ярких примеров является их участие в работе фермента метионинсинтазы, который катализирует превращение гомоцистеина в метионин. Этот процесс не только необходим для поддержания адекватного уровня метионина, но и играет ключевую роль в снижении уровня гомоцистеина в крови – фактора риска сердечно-сосудистых заболеваний. Для этой реакции также требуется витамин B₁₂, что подчеркивает взаимосвязь различных витаминов группы B.
• Синтез нуклеиновых кислот: Фолаты являются незаменимыми для создания и поддержания здоровых новых клеток. Они участвуют в синтезе пуриновых и пиримидиновых оснований (в частности, тимидина), которые являются строительными блоками ДНК и РНК. Это делает фолаты критически важными для всех процессов, связанных с быстрым делением клеток, таких как рост и развитие, кроветворение, регенерация тканей.
• Образование S-аденозилметионина (SAM): Фолатные коферменты необходимы для синтеза SAM – универсального донора метильных групп в организме. SAM участвует в сотнях биологических реакций метилирования, включая метилирование ДНК, РНК, белков и фосфолипидов. Эти процессы имеют фундаментальное значение для экспрессии генов, эпигенетической регуляции, синтеза нейротрансмиттеров и многих других жизненно важных функций.
• Кроветворение и иммунная система: Фолиевая кислота необходима для образования красных кровяных телец. Ее дефицит приводит к мегалобластной анемии, при которой образуются крупные, незрелые эритроциты. Также фолаты играют роль в поддержании нормальной функции иммунной системы.
• Защитная функция при беременности: Фолаты критически важны в периоды быстрого клеточного деления и роста, особенно на ранних стадиях внутриутробного развития. Адекватное потребление фолиевой кислоты до и во время беременности значительно снижает риск преждевременных родов и развития нарушений нервной трубки (например, спина бифида, анэнцефалия) и сердечно-сосудистых нарушений у плода.
• Влияние на нервную систему: Недостаток фолатов в головном и спинном мозге ассоциируется с рядом неврологических заболеваний, включая умственную отсталость, заторможенность и эпилепсию.

Дефицит фолатов: причины и клинические последствия

Дефицит фолатов, несмотря на их повсеместную распространенность в пище, остается глобальной проблемой здравоохранения. Причины его возникновения многообразны:

• Недостаточное поступление с пищей: Несбалансированное питание, анорексия, алкоголизм.
• Нарушение всасывания: Заболевания желудочно-кишечного тракта, такие как целиакия или болезнь Крона, могут значительно снижать способность организма абсорбировать фолаты.
• Повышенная потребность: Беременность, лактация, быстрый рост, некоторые хронические заболевания.
• Прием лекарственных препаратов: Некоторые медикаменты являются антагонистами фолиевой кислоты или ускоряют ее выведение (об этом будет подробнее рассказано ниже).
• Генетические дефекты: Мутации в генах ферментов, участвующих в фолатном цикле (например, метилентетрагидрофолатредуктаза, МТГФР), могут приводить к нарушению метаболизма фолиевой кислоты и снижению образования активных форм.

Клинические последствия дефицита фолатов могут быть весьма серьезными:

• Гипергомоцистеинемия: Это одно из наиболее изученных последствий. При недостатке фолатов нарушается превращение гомоцистеина в метионин, что приводит к накоплению гомоцистеина в крови. Высокие уровни гомоцистеина повышают риск развития сердечно-сосудистых заболеваний, таких как инсульт, инфаркт миокарда, ишемическая болезнь сердца, а также венозной тромбоэмболии.
• Мегалобластная анемия: Как упоминалось выше, дефицит фолатов нарушает нормальное созревание эритроцитов, приводя к их увеличению и снижению функциональности.
• Врожденные пороки развития: Недостаток фолатов у беременных женщин значительно увеличивает риск развития дефектов нервной трубки у плода.
• Неврологические и психические расстройства: Дефицит фолатов связан с повышенным риском депрессии, когнитивных нарушений, периферической нейропатии, а также, как уже отмечалось, с более тяжелыми неврологическими заболеваниями у детей.

Понимание этих аспектов подчеркивает важность адекватного поступления фолатов в организм и необходимость разработки точных и надежных методов их количественного определения.

Электрохимические методы анализа производных птерина: теоретические основы и классификация

Фармацевтический анализ требует инструментов, способных с высокой точностью и чувствительностью определять содержание активных фармацевтических субстанций как в чистом виде, так и в сложных матрицах лекарственных форм. В этом контексте электрохимические методы анализа занимают особое место благодаря своим уникальным преимуществам.

Общие принципы электрохимических методов анализа

Электрохимические методы анализа – это обширная группа аналитических подходов, которые базируются на изучении и использовании электрохимических явлений, происходящих либо непосредственно в исследуемой среде, либо на границе раздела фаз, обычно между электродом и раствором. Эти явления связаны с изменением структуры, химического состава или концентрации анализируемого вещества.

Ключевым принципом является то, что любой электрический параметр – будь то потенциал, сила тока, электрическое сопротивление или диэлектрическая проницаемость – который функционально связан с концентрацией анализируемого вещества в растворе, может служить надежным аналитическим сигналом. А вы действительно понимаете, какие преимущества это дает в условиях современной лаборатории?

В зависимости от характера использования этого сигнала, электрохимические методы можно разделить на:

• Прямые методы: В них аналитический сигнал (например, потенциал или ток) напрямую измеряется и его величина непосредственно связана с концентрацией определяемого вещества.
• Косвенные методы: Эти методы используют электрохимический сигнал для нахождения конечной точки титрования, когда происходит резкое изменение какого-либо параметра в момент эквивалентности.

Для проведения любых электрохимических измерений необходима электрохимическая ячейка (или цепь), которая обычно состоит из:

1. Проводников первого рода: Это электроды, которые обладают электронной проводимостью (металлические или графитовые).
2. Электролита: Это исследуемый раствор, обладающий ионной проводимостью.

Основные группы электрохимических методов

Многообразие электрохимических явлений породило различные аналитические подходы, которые можно классифицировать на пять основных групп.

1. Потенциометрия
   • Принцип: Этот метод основан на измерении электродвижущей силы (ЭДС) обратимых электрохимических цепей. Здесь потенциал рабочего электрода находится вблизи своего равновесного значения. По сути, в потенциометрии измеряется зависимость равновесного электродного потенциала от состава раствора, то есть от активности определяемого иона.
   • Компоненты ячейки: В потенциометрии используются два основных типа электродов:
     • Индикаторные электроды: Их потенциал чувствителен к активности (концентрации) определяемого иона. Примерами могут служить стеклянный электрод для pH-метрии или ионоселективные электроды.
     • Электроды сравнения: Их потенциал остается постоянным и не зависит от состава анализируемого раствора, что обеспечивает стабильную точку отсчета. Типичные примеры – хлоридсеребряный (Ag/AgCl) и каломельный (Hg/Hg₂Cl₂) электроды.
   • Применение: Потенциометрия включает в себя:
     • Редоксметрию: Измерение потенциалов окислительно-восстановительных систем.
     • Ионометрию: Определение концентрации различных ионов (включая pH-метрию для ионов H⁺, катионометрию для катионов, анионометрию для анионов).
     • Потенциометрическое титрование: Здесь потенциал индикаторного электрода измеряется в процессе титрования. Резкое изменение потенциала в точке эквивалентности позволяет точно определить объем титранта.
2. Вольтамперометрия
   • Принцип: В отличие от потенциометрии, вольтамперометрия исследует зависимость тока поляризации от напряжения, прикладываемого к электрохимической ячейке. Здесь потенциал рабочего электрода значительно отличается от равновесного значения, вызывая электрохимическую реакцию. Ключевым явлением является концентрационная поляризация, при которой скорость электрохимической реакции ограничивается скоростью массопереноса электроактивного вещества к поверхности электрода. Величина предельного тока прямо пропорциональна концентрации электроактивного вещества.
   • Компоненты ячейки: В вольтамперометрических измерениях чаще всего используется трехэлектродная ячейка:
     • Индикаторный (рабочий) электрод: На нем протекает изучаемая реакция (например, ртутный капающий, стационарный ртутный пленочный, стеклоуглеродный, золотой, платиновый).
     • Вспомогательный электрод: Служит для замыкания цепи и протекания тока, не влияя на потенциал рабочего электрода.
     • Электрод сравнения: Поддерживает постоянный потенциал.
   • Применение: Вольтамперометрия – наиболее многочисленная и универсальная группа методов. Она широко используется для определения различных веществ в растворах, включая лекарственные препараты. К этой группе относятся:
     • Полярография: Использует ртутный капающий электрод.
     • Амперометрия: Измеряет ток при постоянном потенциале.
     • Инверсионная вольтамперометрия: Метод с предварительным накоплением вещества на электроде, что значительно повышает чувствительность.
     • Циклическая вольтамперометрия: Изучает обратимость и механизм электродных процессов.
3. Кулонометрия
   • Принцип: Эти методы основаны на прямом измерении количества электричества (кулонов), прошедшего через электрохимическую ячейку в процессе реакции. Согласно законам Фарадея, количество вещества, выделившегося на электроде, прямо пропорционально количеству электричества.
   • Применение: Кулонометрия используется для точного количественного определения веществ, особенно в тех случаях, когда необходима высокая точность без использования стандартов.
4. Кондуктометрия
   • Принцип: В кондуктометрии измеряют электропроводность электролитов. Электропроводность раствора зависит от концентрации и подвижности ионов в нем.
   • Применение: Метод чаще всего используется для контроля чистоты воды, определения общей минерализации, а также в кондуктометрическом титровании для определения конечной точки реакции.
5. Диэлектрометрия
   • Принцип: Основана на измерении диэлектрической проницаемости раствора. Изменение диэлектрической проницаемости может быть связано с изменением концентрации анализируемого вещества.
   • Применение: Менее распространенный метод в фармацевтическом анализе, но может быть полезен для неводных растворов или для контроля некоторых процессов.

Преимущества и применимость электрохимических методов для производных птерина

Электрохимические методы обладают рядом преимуществ, делающих их весьма привлекательными для анализа производных птерина, включая фолаты:

• Относительная простота и невысокая стоимость аппаратуры: В сравнении со многими хроматографическими или спектроскопическими методами, электрохимическое оборудование часто более доступно.
• Высокая чувствительность: Особенно методы инверсионной вольтамперометрии позволяют определять вещества в очень низких концентрациях, что критически важно при анализе биологических образцов или следовых количеств.
• Хорошая селективность: Варьирование потенциала, pH среды, типа электрода и других условий позволяет достигать высокой избирательности определения конкретного аналита в сложной смеси. Фолаты, обладая окислительно-восстановительной активностью благодаря своей гетероциклической структуре, являются идеальными кандидатами для электрохимического анализа.
• Экспрессность: Многие электрохимические измерения выполняются быстро, что важно для рутинного контроля качества.
• Легкость автоматизации: Электрохимические сенсоры и анализаторы легко интегрируются в автоматизированные системы, что позволяет использовать их для детектирования веществ в потоках жидкостей, например, в проточной инжекции или при мониторинге процессов.
• Экологичность: В отличие от некоторых хроматографических методов, требующих большого количества органических растворителей, электрохимические методы часто используют водные растворы, что снижает их воздействие на окружающую среду.

Применимость к производным птерина: Молекулы птеринов, и в частности фолатов, содержат в своей структуре азотистые гетероциклы и функциональные группы (амино-, гидрокси-), которые способны к обратимым или необратимым окислительно-восстановительным реакциям на поверхности электрода. Это делает их «электроактивными» соединениями. Например, вольтамперометрические методы могут быть использованы для прямого определения фолиевой кислоты по ее окислительному или восстановительному току. Редокс-активность птеринового ядра позволяет создавать высокочувствительные методики для их количественного определения как в чистых субстанциях, так и в более сложных матрицах, таких как лекарственные препараты и даже биологические жидкости, что особенно актуально для фармакокинетических исследований. Таким образом, электрохимические методы предоставляют не только эффективный, но и экономически выгодный подход к контролю качества и исследованию птериновых производных.

Методики количественного определения фолиевой кислоты в фармацевтических препаратах

Контроль качества фармацевтических препаратов является основополагающим элементом обеспечения их безопасности и эффективности. Государственная фармакопея Российской Федерации (ГФ РФ) XV издания устанавливает строгие стандарты для анализа активных фармацевтических субстанций и готовых лекарственных форм. Фолиевая кислота, как жизненно важный витамин, не является исключением.

Анализ фармацевтической субстанции (кристаллической фолиевой кислоты)

Фармацевтическая субстанция фолиевой кислоты представляет собой чистый активный компонент до его включения в состав готовой лекарственной формы. Согласно фармакопейным требованиям, это кристаллический порошок от желтого до оранжевого цвета, характеризующийся неустойчивостью на свету, что требует особых условий хранения.

Показатели растворимости фолиевой кислоты также имеют важное аналитическое значение:

• Практически нерастворима в воде и спирте 96%.
• Растворима в горячем 8,3% растворе хлористоводородной кислоты.
• Растворима в 10% растворе гидроксида натрия.

Эти характеристики определяют выбор растворителей для подготовки образцов к анализу.

Испытания на подлинность

Подлинность фармацевтической субстанции – это подтверждение того, что исследуемое вещество действительно является заявленной фолиевой кислотой. ГФ РФ предписывает несколько методов для этого:

• ИК-спектрометрия: Инфракрасный спектр поглощения субстанции должен быть идентичен спектру фармакопейного стандартного образца фолиевой кислоты. Этот метод позволяет подтвердить наличие характерных функциональных групп и общей структуры молекулы.
• Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ): После хроматографического разделения, время удерживания пика основного вещества в образце должно точно соответствовать времени удерживания пика стандартного образца фолиевой кислоты. Это подтверждает химическую идентичность и чистоту.
• Спектрофотометрия: 0,001% раствор субстанции, приготовленный в 0,1 М растворе гидроксида натрия, должен демонстрировать характерный спектр поглощения с тремя максимумами: при 256 нм, 283 нм и 365 нм. Для дополнительной идентификации и контроля качества, отношение оптических плотностей (абсорбции) A₂₅₆/A₃₆₅ должно находиться в диапазоне от 2,80 до 3,00. Это соотношение является уникальной спектральной характеристикой фолиевой кислоты.
• Тонкослойная хроматография (ТСХ): Используется для обнаружения примесей и подтверждения подлинности. Анализ проводится на ТСХ пластинке со слоем силикагеля, а сравнительное хроматографирование со стандартным образцом позволяет идентифицировать вещество.
• Качественная реакция: Раствор субстанции после обработки перманганатом калия (сильный окислитель) и последующей перекисью водорода (восстановитель, разрушающий избыток перманганата) должен давать голубую флуоресценцию в УФ-свете (365 нм). Эта реакция обусловлена образованием птеридиновых производных, способных к флуоресценции, и является характерным признаком для фолиевой кислоты.

Количественное определение

Количественное определение является центральным элементом контроля качества, подтверждающим содержание активного вещества.

• Требования к содержанию: Содержание фолиевой кислоты в фармацевтической субстанции должно быть не менее 96,0% и не более 102,0% в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество. Такой узкий диапазон гарантирует высокую степень чистоты и соответствие стандартам.
• Метод определения: Основным методом является Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). Условия проведения ВЭЖХ строго регламентированы:
  • Подвижная фаза: Состоит из метанола и фосфатного буферного раствора в соотношении 12:88. Этот состав подвижной фазы оптимизирован для эффективного разделения фолиевой кислоты от возможных примесей и обеспечения точного количественного определения.

Анализ лекарственного препарата «Фолиевая кислота, таблетки»

Для готовой лекарственной формы – таблеток фолиевой кислоты – также установлены строгие нормы качества.

• Требования к содержанию: Препарат должен содержать не менее 90,0% и не более 110,0% от заявленного количества фолиевой кислоты C₁₉H₁₉N₇O₆. Более широкий диапазон по сравнению с субстанцией объясняется сложностью равномерного распределения активного вещества в твердой лекарственной форме и допустимыми производственными отклонениями.

Методы контроля качества для таблеток

Для анализа таблеток используются те же высокоэффективные методы, что и для субстанции, адаптированные под матрицу готового препарата:

• ВЭЖХ: Применяется для точного количественного определения фолиевой кислоты в таблетках. Методика аналогична описанной для субстанции, но требует специфической подготовки образца для извлечения фолиевой кислоты из таблеточной массы.
• Спектрофотометрия: Также используется для количественного анализа. Для проведения спектрофотометрического анализа таблеток:
  1. Несколько таблеток тщательно растирают в мелкий порошок.
  2. Из этого порошка готовят раствор, содержащий 1,0 мг фолиевой кислоты, растворяя его в 0,1 М растворе гидроксида натрия. Щелочная среда необходима для растворения фолиевой кислоты.
  3. Полученный раствор фильтруют для удаления нерастворимых вспомогательных веществ.
  4. Далее проводят измерение оптической плотности полученного фильтрата при характерных максимумах поглощения и рассчитывают содержание фолиевой кислоты.

Таким образом, фармакопейные статьи предоставляют исчерпывающий набор инструментов для всестороннего анализа фолиевой кислоты, обеспечивая строгий контроль ее качества на всех этапах – от исходной субстанции до готового лекарственного препарата. Применение методов, таких как ИК-спектрометрия, ВЭЖХ и спектрофотометрия, позволяет гарантировать подлинность, чистоту и точное содержание активного вещества, что является залогом эффективности и безопасности медикаментов.

Фармакокинетика лекарственных препаратов производных птерина и методы их изучения

Изучение фармакокинетики – это путешествие молекулы лекарства сквозь организм, от момента ее поступления до полного выведения. Для производных птерина, в особенности фолатов, это путешествие особенно интересно, поскольку оно включает в себя не только стандартные процессы абсорбции, распределения, метаболизма и экскреции (ADME), но и сложные биохимические циклы, тесно связанные с генетикой и диетой.

Абсорбция и метаболизм фолатов

Когда мы говорим о фолатах, важно помнить, что их путь в организме начинается с различия между природными формами и синтетической фолиевой кислотой.

• Природные фолаты, поступающие с пищей, уже частично активны и всасываются в желудочно-кишечном тракте в виде 5-метилтетрагидрофолата (5-МТГФ). Эта форма является основным фолатом в плазме крови и внутри клетки служит прямым донором метильных групп, а также основным источником биологически активного тетрагидрофолата.
• Синтетическая фолиевая кислота (птероилмоноглутаминовая кислота), используемая в большинстве добавок, биологически неактивна. Чтобы стать функциональной, она должна быть метаболизирована в активные формы фолатов, такие как тетрагидрофолат (ТГФ) и 5-МТГФ. Этот процесс происходит преимущественно в печени и кишечнике и требует участия двух ключевых ферментов:
  • Дигидрофолатредуктаза (ДГФР): Восстанавливает фолиевую кислоту до дигидрофолата, а затем до тетрагидрофолата.
  • Метилентетрагидрофолатредуктаза (МТГФР): Превращает 5,10-метилентетрагидрофолат в 5-МТГФ.

Проблема возникает, когда нарушается работа этих ферментных систем. Например, генетические дефекты (полиморфизмы) в гене, кодирующем МТГФР, могут значительно снижать активность этого фермента. У таких людей эффективность препаратов на основе неактивной фолиевой кислоты существенно снижается, поскольку они не могут эффективно преобразовывать ее в биологически активную форму. В этих случаях особую ценность приобретает активная форма фолата L-метилфолат (5-МТГФ). Она всасывается в желудочно-кишечном тракте в неизмененном виде и не требует сложного ферментативного превращения, обеспечивая прямую доступность для клеточных процессов.

Фолатный цикл и его биологическое значение

Фолатный цикл – это центральный биохимический каскад, в котором производные фолиевой кислоты выступают в качестве коферментов, обеспечивая метаболизм одноуглеродных фрагментов. Этот цикл не просто сложен, он является сердцем многих клеточных функций, от репликации ДНК до поддержания целостности сосудов.

Основное назначение фолатного цикла – перенос метильных групп. Ключевой реакцией является метаболизм гомоцистеина. В этом процессе 5-МТГФ донирует свою метильную группу для превращения потенциально токсичного гомоцистеина в незаменимую аминокислоту метионин. Этот процесс катализируется ферментом метионинсинтазой, и, как уже упоминалось, требует также витамина B₁₂.

Метионин, в свою очередь, является предшественником S-аденозилметионина (SAM). SAM – это не просто донор метильных групп; это универсальный метилирующий агент, участвующий в большинстве биологических реакций метилирования. Он необходим для:

• Синтеза и метилирования ДНК и РНК: Важно для регуляции генной экспрессии и эпигенетических процессов.
• Синтеза белков и фосфолипидов: Имеет значение для структуры и функции клеточных мембран, а также для синтеза нейротрансмиттеров.

Таким образом, фолатный цикл обеспечивает критическую связь между метаболизмом гомоцистеина, синтезом метионина и глобальными процессами метилирования, влияющими на здоровье клетки и всего организма.

Феномен «фолиевого парадокса» и его последствия

В последнее время все больше внимания уделяется феномену, получившему название «фолиевого парадокса». Он возникает при избыточном потреблении синтетической фолиевой кислоты, особенно в высоких дозах (более 1000 мкг/таблетка).

• Механизм: «Фолиевый парадокс» проявляется в том, что высокие концентрации неактивной фолиевой кислоты могут подавлять физиологический метаболизм фолатов. Это происходит из-за насыщения фермента дигидрофолатредуктазы и других звеньев фолатного цикла. В результате, вместо того чтобы эффективно превращаться в биологически активные тетрагидрофолаты, избыток неметаболизированной фолиевой кислоты накапливается в крови.
• Последствия: Накопление неметаболизированной фолиевой кислоты может иметь негативные последствия, хотя их полный спектр еще изучается. Предполагается, что оно может конкурировать с активными фолатами за транспортные системы и рецепторы, потенциально нарушая их функции и даже маскируя дефицит витамина B₁₂.
• Решение: В отличие от неактивной фолиевой кислоты, избыток активных форм фолатов, таких как L-метилфолат, не тормозит фолатный метаболизм и, согласно текущим данным, не вызывает характерных побочных эффектов. Это делает их предпочтительными в ряде клинических ситуаций, особенно для пациентов с нарушениями фолатного цикла.

Методы изучения фармакокинетики производных птерина

Для полноценного понимания фармакокинетики производных птерина необходимы точные и чувствительные методы их определения в различных биологических матрицах.

1. Анализ уровня фолиевой кислоты и фолатов в крови:
   • Хемилюминесцентный иммуноанализ на микрочастицах (ИХЛА): Современный, высокочувствительный и автоматизированный метод, широко используемый в клинических лабораториях для количественного определения как фолиевой кислоты, так и активных фолатов (5-МТГФ) в сыворотке или плазме крови.
   • Иммуноферментный анализ (ИФА): Также широко применяется для определения уровня фолатов в крови. Основан на реакции антиген-антитело, где ферментативная реакция генерирует измеряемый сигнал.
   • Эти методы позволяют оценить дефицит фолатов, мониторить эффективность терапии и проводить фармакокинетические исследования, измеряя C_max (максимальную концентрацию), T_max (время достижения максимальной концентрации) и AUC (площадь под кривой «концентрация-время») после приема препарата.
2. Исследования на клеточных культурах (in vitro):
   • Используются для изучения роли фолатов в специфических клеточных процессах, таких как пролиферация, дифференцировка, миграция и инвазия. Например, можно исследовать, как различные формы фолатов влияют на метаболизм раковых клеток или на развитие нейронов.
3. Протеомические исследования на животных (in vivo):
   • Модели на животных (например, крысы с индуцированным дефицитом фолиевой кислоты) позволяют изучать влияние фолатов на глобальные белковые профили (протеомику) различных тканей и органов. Эти исследования помогают подтверждать данные, полученные на клеточных моделях, и выявлять новые молекулярные мишени и пути, модулируемые фолатами.
4. Измерение уровня 5-МТГФ в спинномозговой жидкости (СМЖ):
   • Крайне важно для диагностики церебральной фолатной недостаточности у педиатрических пациентов. Этот синдром характеризуется низким уровнем 5-МТГФ в СМЖ, несмотря на нормальные или повышенные уровни в крови, и может приводить к серьезным неврологическим нарушениям. Точное измерение в СМЖ позволяет своевременно назначить адекватную терапию, обычно активными формами фолатов.

Сочетание этих методов дает всестороннее понимание того, как производные птерина взаимодействуют с организмом, что является основой для разработки более эффективных и безопасных лекарственных препаратов и стратегий лечения.

Лекарственные взаимодействия препаратов производных птерина и их механизмы

Фармакологический ландшафт часто напоминает сложное переплетение дорог, где одни лекарства могут помогать другим добраться до цели, а другие – создавать препятствия. В случае с производными птерина, и в частности фолатами, лекарственные взаимодействия играют критическую роль, определяя эффективность терапии и потенциальные риски. Понимание механизмов этих взаимодействий не просто полезно, а жизненно необходимо для практикующего врача и фармацевта.

Взаимодействие с антиметаболитами и противоопухолевыми препаратами

Одним из наиболее ярких примеров взаимодействия является антагонизм с метотрексатом.

• Механизм: Метотрексат – мощный антиметаболит и противоопухолевый препарат. Его действие основано на ингибировании фермента дигидрофолатредуктазы (ДГФР). ДГФР – ключевой фермент, необходимый для восстановления дигидрофолата до тетрагидрофолата, а также для преобразования неактивной фолиевой кислоты в ее активные формы. Ингибируя ДГФР, метотрексат блокирует синтез активных фолатов, что в конечном итоге нарушает синтез пуринов и тимидина – строительных блоков ДНК. Это приводит к подавлению пролиферации быстро делящихся клеток, что используется в терапии онкологических и аутоиммунных заболеваний.
• Клиническое значение: Поскольку метотрексат действует как антагонист фолиевой кислоты, для снижения его побочных эффектов (например, миелосупрессии, мукозита) часто назначают «спасательную» терапию с использованием фолиевой кислоты или, что более эффективно, лейковорина (фолиниевой кислоты – активной формы фолата), которая может обходить блок ДГФР.

Взаимодействие с противосудорожными препаратами

Некоторые противосудорожные препараты, используемые для лечения эпилепсии, могут негативно влиять на метаболизм фолатов.

• Механизм: К таким препаратам относятся фенитоин и карбамазепин. Эти препараты, особенно при длительном применении, стимулируют активность ферментов печени, ответственных за метаболизм ксенобиотиков, включая фолиевую кислоту. Это приводит к ускорению ее распада и выведения из организма. В результате наблюдается снижение уровня фолатов в сыворотке крови.
• Клиническое значение: Дефицит фолатов, вызванный противосудорожными препаратами, может быть опасен, так как он повышает риск развития мегалобластной анемии и, что особенно важно, может усугублять неврологические симптомы или даже влиять на эффективность противосудорожной терапии. Беременным женщинам, принимающим эти препараты, требуется особо тщательный мониторинг уровня фолатов и, как правило, назначение высоких доз фолиевой кислоты для предотвращения дефектов нервной трубки у плода.

Взаимодействие с антибактериальными и противомалярийными препаратами

Этот класс взаимодействий демонстрирует, как фолатный метаболизм используется в качестве мишени для борьбы с патогенами.

• Сульфаниламидные препараты: Ярким примером являются сульфаниламиды, которые функционируют как антивитамины B₉ для бактерий.
  • Механизм: Эти препараты, например, сульфаметоксазол (компонент Бисептола), имеют структурное сходство с парааминобензойной кислотой (ПАБК) – ключевым компонентом, необходимым бактериям для синтеза собственной фолиевой кислоты. В бактериальных клетках сульфаниламиды конкурентно ингибируют фермент дигидроптероатсинтазу, который отвечает за включение ПАБК в молекулу дигидрофолиевой кислоты. Таким образом, они нарушают синтез фолиевой кислоты у бактерий, что в конечном итоге подавляет синтез ДНК и их размножение.
  • Триметоприм: Второй компонент Бисептола, триметоприм, действует синергично с сульфаметоксазолом. Он ингибирует бактериальную дигидрофолатредуктазу, препятствуя восстановлению дигидрофолиевой кислоты до активной тетрагидрофолиевой кислоты. Комбинированное действие этих двух препаратов обеспечивает мощный бактериостатический эффект. У человека применение Бисептола также может приводить к снижению уровня фолатов, особенно при длительном приеме.
• Противомалярийные препараты: Некоторые противомалярийные препараты, например, фансидар, также нарушают обмен фолиевой кислоты, но уже у плазмодиев – возбудителей малярии. Длительное применение таких препаратов у человека (более 3 месяцев) может привести к снижению уровня фолиевой кислоты, требуя одновременного приема ее добавок.

Взаимодействие с другими лекарственными средствами

Помимо вышеупомянутых, существует ряд других препаратов, способных влиять на уровень фолатов:

• «Аспирин» (ацетилсалициловая кислота): Высокие дозы и длительное применение «Аспирина» могут приводить к снижению уровня фолиевой кислоты, хотя точный механизм не всегда полностью ясен.
• Сульфасалазин: Этот препарат, используемый для лечения воспалительных заболеваний кишечника (например, болезнь Крона, язвенный колит), снижает уровень фолиевой кислоты, предположительно, из-за ингибирования ее абсорбции в желудочно-кишечном тракте.
• Эстрогены и пероральные контрацептивы: Гормональные контрацептивы, содержащие эстрогены, могут приводить к снижению уровня витаминов группы B, включая фолиевую кислоту, в сыворотке крови. Механизм этого взаимодействия до конца не изучен, но считается, что эстрогены могут влиять на метаболизм и утилизацию фолатов.

Взаимосвязь с дефицитом витамина B₁₂

Завершая обсуждение взаимодействий, нельзя обойти вниманием критическую взаимосвязь фолатного метаболизма с витамином B₁₂ (кобаламином).

• Механизм: Как уже упоминалось, витамин B₁₂ является кофактором для фермента метионинсинтазы, который катализирует превращение гомоцистеина в метионин, используя 5-метилтетрагидрофолат как донор метильной группы.
  При дефиците витамина B₁₂ эта реакция блокируется. В результате 5-метилтетрагидрофолат «запирается» в своей метилированной форме и не может быть деметилирован для высвобождения тетрагидрофолата – активной формы, необходимой для других клеточных нужд (например, синтеза пуринов и тимидина). Это явление известно как «ловушка метилфолата».
• Последствия: Дефицит витамина B₁₂ приводит к функциональному внутриклеточному дефициту тетрагидрофолиевой кислоты, даже если общий уровень фолатов в крови нормальный или повышенный. Это усугубляет симптомы мегалобластной анемии и может вызывать тяжелые неврологические нарушения. Поэтому при диагностике дефицита фолатов всегда важно исключить дефицит витамина B₁₂, чтобы избежать ошибочной терапии, которая может маскировать симптомы B₁₂-дефицитной анемии, но не устранять неврологические осложнения.

Глубокий анализ этих взаимодействий подчеркивает необходимость комплексного подхода к назначению и мониторингу препаратов фолиевой кислоты, особенно у пациентов, принимающих другие медикаменты, чтобы избежать нежелательных эффектов и обеспечить максимальную терапевтическую пользу.

Перспективы и современные вызовы в анализе и фармакокинетике птериновых производных

Исследование производных птерина – это постоянно развивающаяся область, где инновации в аналитических методах и углубление понимания фармакокинетики открывают новые горизонты. Однако на пути к этим горизонтам стоят и серьезные вызовы, требующие постоянного поиска решений.

Развитие электрохимических методов анализа

Будущее аналитической химии в значительной степени связано с развитием методов, способных предложить более высокую скорость, чувствительность и удобство. Электрохимические методы анализа, благодаря своим внутренним преимуществам, находятся на переднем крае этих инноваций.

• Перспективы:
  • Простота выполнения и невысокая стоимость: Эти качества останутся движущей силой для разработки новых, более доступных анализаторов, особенно актуальных для стран с ограниченными ресурсами или для внедрения в малые лаборатории и пункты первичной диагностики.
  • Высокая чувствительность и избирательность: Развитие наноматериалов и модифицированных электродов обещает еще больше повысить чувствительность до уровня, необходимого для определения ультрамалых концентраций фолатов в биологических жидкостях, и улучшить селективность, минимизируя влияние матричных эффектов.
  • Экспрессность и легкость автоматизации: Способность электрохимических сенсоров быстро генерировать отклик делает их идеальными для интеграции в автоматизированные системы. Это открывает путь для создания поточных анализаторов, систем «лаборатория на чипе» и даже портативных устройств для экспресс-диагностики уровня фолатов, например, в условиях клиники или скорой помощи. Такие системы могут детектировать вещества в потоках жидкостей, что крайне ценно для мониторинга в реальном времени.
• Современные вызовы:
  • Переход от токсичных ртутных электродов к твердым: Исторически полярография и другие вольтамперометрические методы широко использовали ртутные электроды из-за их уникальных электрохимических свойств. Однако высокая токсичность ртути и экологические требования диктуют необходимость их замены. Современные исследования активно сфокусированы на разработке и оптимизации твердых электродов, таких как стеклоуглеродные, борно-допированные алмазные, а также электродов, модифицированных наноматериалами (углеродные нанотрубки, графен, металлические наночастицы). Задача состоит в том, чтобы новые твердые электроды обеспечивали сопоставимую или даже превосходящую чувствительность, воспроизводимость и стабильность, при этом оставаясь безопасными и экономически целесообразными.
  • Стандартизация и валидация новых методов: По мере появления новых электрохимических подходов, возникает необходимость в их строгой валидации в соответствии с фармакопейными требованиями и международными стандартами, чтобы обеспечить их надежность и применимость в фармацевтическом анализе.

Вызовы в фармакокинетических исследованиях и персонализированная медицина

Фармакокинетика фолатов – это область, где персонализированный подход становится не просто желательным, а необходимым, сталкиваясь с рядом серьезных вызовов.

• Проблемы усвоения фолатов:
  • Нарушения питания и образа жизни: Анорексия, хронический алкоголизм и другие состояния, связанные с недостаточным питанием или нарушением пищеварения, могут приводить к значительному понижению усвоения как природных фолатов, так и синтетической фолиевой кислоты.
  • Генетические дефекты ферментных систем: Это, пожалуй, один из наиболее значимых вызовов. Мутации в генах, кодирующих ферменты фолатного цикла, такие как метилентетрагидрофолатредуктаза (МТГФР), могут существенно снижать их активность. Например, гомозиготная мутация C677T в гене MTHFR приводит к снижению активности фермента до 30-35%, что значительно затрудняет превращение неактивной фолиевой кислоты в активные формы. У таких людей прием стандартных препаратов фолиевой кислоты может быть неэффективным.
  • «Фолиевый парадокс»: Как уже обсуждалось, избыток неактивной фолиевой кислоты может блокировать фолатный метаболизм. Этот феномен является серьезным вызовом, поскольку широкомасштабное обогащение продуктов питания фолиевой кислотой и бесконтрольный прием добавок могут приводить к накоплению неметаболизированной фолиевой кислоты с потенциально негативными последствиями.
• Персонализированный подход: Для преодоления этих вызовов все более актуальным становится использование активных форм фолатов, таких как L-метилфолат. Эти формы не требуют ферментативного превращения и могут быть непосредственно использованы организмом, что особенно важно для пациентов с генетическими мутациями МТГФР или другими нарушениями фолатного цикла. Переход к персонализированной медицине, основанной на генетическом тестировании и индивидуальном подборе формы и дозировки фолатов, является ключевым направлением развития.

Необходимость дальнейших исследований

Несмотря на обширные знания о фолатах, многие аспекты их биологической роли и влияния на здоровье остаются не до конца изученными, требуя дальнейших глубоких исследований.

• Влияние фолатов на метаболические показатели: Существует потребность в более детальном понимании механизма влияния фолатов на показатели, связанные с ожирением, такие как окружность талии, уровень триглицеридов и глюкозы натощак. Эти исследования могут открыть новые терапевтические стратегии для борьбы с метаболическим синдромом.
• Долгосрочные эффекты «фолиевого парадокса»: Необходимо углубленное изучение потенциальных долгосрочных последствий накопления неметаболизированной фолиевой кислоты для здоровья человека, включая ее влияние на когнитивные функции, иммунную систему и риск развития онкологических заболеваний.
• Оптимизация дозировок и форм фолатов: Продолжаются исследования по определению оптимальных дозировок активных и неактивных форм фолатов для различных групп населения и клинических состояний, с учетом генетических особенностей и диетических привычек.

Таким образом, область изучения птериновых производных представляет собой динамичное поле для научных открытий, где постоянное взаимодействие между аналитической химией, фармакологией и генетикой будет определять будущее медицины и фармацевтики.

Заключение

Путешествие по миру производных птерина, в частности фолатов, раскрывает перед нами одну из самых захватывающих и жизненно важных страниц в фармацевтическом анализе и фармакологии. Эти соединения, от простейших пигментов до сложных кофакторов, являются незаменимыми звеньями в метаболизме, определяя фундаментальные процессы от репликации ДНК до поддержания здоровья нервной системы и успешного развития плода.

В рамках данной работы мы детально исследовали химическую структуру и биологическую роль птеринов и фолатов, подчеркнув их критическое значение для создания и поддержания здоровых клеток, метаболизма аминокислот и нуклеиновых кислот, а также образования S-аденозилметионина. Особое внимание было уделено различиям между натуральными фолатами и синтетической фолиевой кислотой, а также последствиям дефицита этих соединений, включая гипергомоцистеинемию и мегалобластную анемию.

Центральное место в аналитической части заняло углубленное рассмотрение электрохимических методов количественного определения. Мы подробно описали теоретические основы потенциометрии, вольтамперометрии, кулонометрии и кондуктометрии, обосновав их преимущества – простоту, чувствительность, селективность и потенциал для автоматизации – что делает их идеальным инструментарием для фармацевтического анализа птериновых производных. Были представлены конкретные фармакопейные методики анализа фолиевой кислоты в кристаллической субстанции и таблетках, детально описаны испытания на подлинность (ИК-спектрометрия, ВЭЖХ, спектрофотометрия, ТСХ, качественные реакции) и количественное определение, что является критически важным для обеспечения качества лекарственных препаратов.

Фармакокинетический аспект работы позволил погрузиться в механизмы абсорбции и метаболизма фолатов, где была подчеркнута роль ферментов дигидрофолатредуктазы и метилентетрагидрофолатредуктазы, а также значимость активных форм, таких как L-метилфолат. Феномен «фолиевого парадокса» и его потенциальные последствия при избыточном потреблении неактивной фолиевой кислоты был детально проанализирован, что подчеркивает необходимость персонализированного подхода в терапии. Обсуждены современные методы изучения фармакокинетики, включая ИХЛА, ИФА, исследования на клеточных культурах и животных, а также измерение 5-МТГФ в спинномозговой жидкости.

Раздел о лекарственных взаимодействиях выявил сложные биохимические механизмы, лежащие в основе антагонизма метотрексата, влияния противосудорожных препаратов, антибактериальных средств (сульфаниламиды, триметоприм) и других лекарств на метаболизм фолатов, а также критическую взаимосвязь с дефицитом витамина B₁₂.

В заключительном разделе были обозначены перспективы и вызовы, стоящие перед учеными и практиками. Развитие электрохимических методов анализа в направлении использования твердых электродов и повышения автоматизации, а также вызовы в фармакокинетике, связанные с генетическими дефектами и «фолиевым парадоксом», указывают на необходимость дальнейших исследований и внедрения персонализированной медицины.

Таким образом, данная работа не только систематизирует и углубляет существующие знания о производных птерина, но и демонстрирует комплексный характер их изучения, интегрируя данные из фармацевтической химии, аналитической химии и фармакологии. Она подчеркивает критическую значимость детального фармацевтического анализа и фармакокинетических исследований для разработки безопасных и эффективных лекарственных препаратов, а также обозначает перспективные направления д��я будущих научных изысканий в этой жизненно важной области.

Список использованной литературы

1. Василенко Ю.К. Биологическая химия. — М.: Высшая школа, 1978. — 320 с.
2. Варфоломеев С.Д., Гуревич К.Г. Биокинетика: Практический курс. – М.: ФАИР-ПРЕСС, 1999. – 720 с.: ил.
3. Тюкавкина Н.А., Бауков Ю.И. Биоорганическая химия: учебник для вузов. – 4-е изд., стереотип. – М.: Дрофа, 2005. – 542 с.: ил.
4. Харкевич Д.А. Фармакология: Учебник. – 8-е изд., перераб., доп. и испр. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. – 736 с.: ил.
5. Несмеяноа А.Н., Несмеянова Н.А. Начала органической химии. В двух книгах. Книга 2. – 2-е изд. – М.: Химия, 1974. – 744 с.: ил.
6. Марри Р., Греннер Д., Мейес П. и др. Биохимия человека: Пер. с англ. – М.: Мир, 2004. – 381 с.: ил.
7. Девятин В.А. Методы химического анализа в производстве витаминов. – М.: Медицина, 1964. – 361 с.: ил.
8. Фолиевая кислота. Википедия. URL: https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%A4%D0%BE%D0%BB%D0%B8%D0%B5%D0%B2%D0%B0%D1%8F_%D0%BA%D0%B8%D1%81%D0%BB%D0%BE%D1%82%D0%B0 (дата обращения: 17.10.2025).
9. Фолаты — незаменимые витамины для здоровья и долголетия. URL: https://www.tervisliku.ee/ru/folaty-nezamenimye-vitaminy-dlya-zdorovya-i-dolgoletiya (дата обращения: 17.10.2025).
10. Что такое Птерины? Wordhelp. URL: https://wordhelp.ru/index.php?word=%D0%9F%D0%A2%D0%95%D0%A0%D0%98%D0%9D%D0%AB (дата обращения: 17.10.2025).
11. Птерины. Большой энциклопедический словарь. URL: https://dic.academic.ru/dic.nsf/enc3p/247952 (дата обращения: 17.10.2025).
12. Фолаты, фолиевая кислота. Toitumine.ee. URL: https://toitumine.ee/ru/folaty-folievaya-kislota (дата обращения: 17.10.2025).
13. Птерин. Википедия. URL: https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%9F%D1%82%D0%B5%D1%80%D0%B8%D0%BD (дата обращения: 17.10.2025).
14. Фолиевая кислота. Институт фармакопеи и стандартизации ФГБУ НЦЭСМП. URL: https://ncesmp.ru/wp-content/uploads/2021/08/%D0%A4%D0%A1_%D0%A4%D0%BE%D0%BB%D0%B8%D0%B5%D0%B2%D0%B0%D1%8F_%D0%BA%D0%B8%D1%81%D0%BB%D0%BE%D1%82%D0%B0_180807.doc (дата обращения: 17.10.2025).
15. Фолаты (анализ на фолиевую кислоту). ЛабКвест. URL: https://labquest.ru/catalog/analizy/folaty-analiz-na-folievuyu-kislotu (дата обращения: 17.10.2025).
16. Фолаты и Лефол: правильная форма витамина B9 для здоровья и беременности. URL: https://lefol.ru/blog/folaty-i-lefol-pravilnaya-forma-vitamina-b9-dlya-zdorovya-i-beremennosti (дата обращения: 17.10.2025).
17. Фолиевая кислота: применение, польза и рекомендации по приёму. Anti-Age Expert. URL: https://antiage-expert.com/article/foleyvaya-kislota (дата обращения: 17.10.2025).
18. Государственная фармакопея (страница: 1). URL: https://www.fptl.ru/biblioteka/farmakopeya.html (дата обращения: 17.10.2025).
19. Активные формы фолатов в акушерстве. URL: https://medbook.ru/article/aktivnye-formy-folatov-v-akusherstve (дата обращения: 17.10.2025).
20. РОЛЬ ФОЛАТОВ В РЕПРОДУКЦИИ. uMEDp.ru. URL: https://umedp.ru/articles/rol_folatov_v_reproduktsii.html (дата обращения: 17.10.2025).
21. Генетика метаболизма фолатов. Лаборатория БиоЛинк. URL: https://biolink.ru/genetika-metabolizma-folatov (дата обращения: 17.10.2025).
22. Птеридин. Википедия. URL: https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%9F%D1%82%D0%B5%D1%80%D0%B8%D0%B4%D0%B8%D0%BD (дата обращения: 17.10.2025).
23. ФС_Фолиевая_кислота_180807.doc. Министерство здравоохранения Российской Федерации. URL: https://minzdrav.gov.ru/documents/8593-fs_folievaya_kislota_180807.doc (дата обращения: 17.10.2025).
24. Проект_ФС_Фолиевая_кислота. МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ. URL: https://minzdrav.gov.ru/documents/8593-proekt_fs_folievaya_kislota.doc (дата обращения: 17.10.2025).
25. Возможные биохимические механизмы, вовлеченные в благотворные и побочные эффекты фолатов. КиберЛенинка. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/vozmozhnye-biohimicheskie-mehanizmy-vovlechennye-v-blagotvornye-i-pobochnye-effekty-folatov (дата обращения: 17.10.2025).
26. Фолиевая кислота или Фолат — Что Это, В чем разница, Назначение, Польза для Беременных, Источники, Как принимать? URL: https://wellbe.ru/articles/folievaya-kislota-folat-v-chem-raznica (дата обращения: 17.10.2025).
27. Лекция 11 ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА. URL: https://studfile.net/preview/4489370 (дата обращения: 17.10.2025).
28. Электрохимические методы анализа. URL: https://www.chem.msu.ru/rus/teaching/electr_anal/welcome.html (дата обращения: 17.10.2025).
29. Электрохимические методы анализа: учебное пособие. Электронный научный архив УрФУ. URL: https://elar.urfu.ru/bitstream/10995/82774/1/978-5-7996-2715-9.pdf (дата обращения: 17.10.2025).
30. ПОТЕНЦИОМЕТРИЯ. Энгельсский Технологический Институт. URL: https://eti.edu.ru/files/docs/science/publikacii/2021/Potenciometriya.pdf (дата обращения: 17.10.2025).