Исследование особенностей водных растворов глюконата кальция: от физико-химических основ до статистического анализа стабильности

Жидкие лекарственные формы, получаемые путем растворения или смешивания активных веществ в подходящих растворителях, занимают особое место в фармацевтике благодаря своей высокой биодоступности, удобству применения и возможности точного дозирования. В этом многообразии особое внимание уделяется водным растворам, которые, несмотря на кажущуюся простоту, представляют собой сложные физико-химические системы, требующие глубокого изучения. Среди них — 10% раствор глюконата кальция, незаменимый препарат в клинической практике для коррекции дефицита кальция. Однако его производство и хранение сопряжены с рядом технологических вызовов, обусловленных его метастабильным характером, что напрямую влияет на безопасность и эффективность применения.

Настоящая курсовая работа ставит своей целью всестороннее исследование особенностей водных растворов глюконата кальция. В ходе работы будут проанализированы фундаментальные физико-химические свойства жидких лекарственных форм, детально рассмотрены химическая структура и характеристики глюконата кальция, изучены методы его синтеза и стабилизации в растворах. Особое внимание будет уделено современным фармакопейным и альтернативным методам анализа, а также критически важным аспектам стабильности и контроля качества. Завершающий раздел будет посвящен углубленному анализу статистических методов, необходимых для научно обоснованной оценки результатов исследований стабильности и определения сроков годности, что позволяет предсказать поведение препарата на протяжении всего его жизненного цикла.

Методология исследования опирается на принципы фармацевтической и аналитической химии, с привлечением данных Государственной Фармакопеи Российской Федерации (актуального издания), международных фармакопей, рецензируемых научных публикаций и патентов. Такой комплексный подход позволит не только систематизировать имеющиеся знания, но и выявить «слепые зоны» в понимании процессов, связанных с глюконатом кальция, предлагая пути для дальнейших исследований и оптимизации производства.

Теоретические основы жидких лекарственных форм и водных растворов

Жидкие лекарственные формы — это краеугольный камень современной фармации, обеспечивающий комфорт применения, высокую биодоступность и возможность точного дозирования активных фармацевтических субстанций. Их многообразие обусловлено различными способами приготовления, от простого растворения до сложных экстракционных процессов, но в основе всегда лежит принцип дисперсных систем, где действующие вещества равномерно распределены в жидкой среде, обеспечивая гомогенность и предсказуемость действия. Понимание их фундаментальных свойств является отправной точкой для разработки и контроля качества любых жидких препаратов.

Классификация и общие физико-химические свойства водных растворов

В фармацевтике все жидкие лекарственные формы, независимо от способа получения (смешивание, растворение, экстракция), представляют собой свободные всесторонне дисперсные системы. Их ключевое свойство — растворимость — определяет, насколько эффективно активное вещество сможет перейти в раствор и равномерно распределиться.

Государственная фармакопея Российской Федерации (ГФ) регламентирует степень растворимости, используя как качественные термины, так и строгие количественные характеристики. Это позволяет стандартизировать описание и прогнозировать поведение субстанций в различных растворителях.

Таблица 1: Фармакопейная классификация степени растворимости

Условный термин	Количество растворителя (мл) для растворения 1 г вещества
Очень легко растворим	до 1 мл включительно
Легко растворим	от 1 до 10 мл включительно
Растворим	от 10 до 30 мл включительно
Умеренно растворим	от 30 до 100 мл включительно
Мало растворим	от 100 до 1000 мл включительно
Очень мало растворим	от 1000 до 10 000 мл включительно
Практически нерастворим	более 10 000 мл

Важно различать типы дисперсных систем, поскольку их физико-химические свойства и требования к контролю качества существенно отличаются:

• Истинные растворы — это гомогенные системы, в которых растворенное вещество существует в виде отдельных молекул или ионов. Они всегда прозрачны и не содержат видимых взвешенных частиц или осадка. Примером может служить раствор поваренной соли в воде.
• Коллоидные растворы — занимают промежуточное положение между истинными растворами и грубодисперсными системами. Размер частиц дисперсной фазы в них варьируется от 0,001 до 0,1 мкм. Они могут быть прозрачными или слегка опалесцирующими, но частицы в них не оседают под действием силы тяжести.
• Суспензии — гетерогенные системы, состоящие из нерастворимых твердых частиц (от 0,1 до 50 мкм и более), равномерно распределенных в жидкой среде. Они всегда мутные и со временем склонны к седиментации (оседанию частиц).
• Эмульсии — также гетерогенные системы, но состоящие из двух несмешивающихся жидкостей, одна из которых (дисперсная фаза) находится в виде мельчайших капель, распределенных в другой (дисперсионной среде).

Для фармацевтических целей особые требования предъявляются к воде, используемой для приготовления растворов. Для внутреннего, наружного или местного применения используется вода очищенная, а для инъекционных форм — вода для инъекций, которая дополнительно проходит строгую очистку от пирогенов и микроорганизмов.

Влияние физико-химических свойств субстанций на выбор лекарственной формы

Физико-химические свойства активной фармацевтической субстанции (АФС) являются определяющими при выборе оптимальной лекарственной формы. Химический состав, особенности строения молекулы, ее полярность, а также кислотно-основные и окислительно-восстановительные свойства напрямую влияют на растворимость, стабильность и биодоступность препарата. От этого выбора зависит не только удобство применения, но и эффективность терапии.

Например, вещества с высокой полярностью и способностью образовывать водородные связи будут хорошо растворяться в воде, тогда как неполярные соединения потребуют использования органических растворителей или специальных вспомогательных веществ. Кислотно-основные свойства влияют на ионизацию молекулы в растворе, что, в свою очередь, изменяет ее растворимость, проницаемость через биологические мембраны и стабильность. Понимание этих взаимосвязей критически важно для прогнозирования фармакологической активности, безопасности и эффективности будущего лекарственного средства. Неправильный выбор растворителя или лекарственной формы может привести к снижению терапевтического эффекта, усилению побочных реакций или полной потере стабильности препарата.

Роль вспомогательных веществ в стабилизации и улучшении свойств растворов

Вспомогательные вещества — это незаменимые компоненты жидких лекарственных форм, которые, не обладая собственной фармакологической активностью (или обладая ею в минимальной степени), существенно улучшают технологические, физико-химические и биофармацевтические характеристики препарата. Их функции многообразны, и они играют решающую роль в обеспечении безопасности и эффективности.

• Формообразователи: Обеспечивают необходимую консистенцию и объем раствора.
• Солюбилизаторы: Позволяют растворять труднорастворимые вещества, увеличивая их концентрацию в растворе (например, ПАВ, циклодекстрины).
• Стабилизаторы: Предотвращают или замедляют процессы деградации активных веществ (гидролиз, окисление), а также физическую нестабильность (седиментация, коагуляция, агрегация частиц в суспензиях и эмульсиях). К ним относятся антиоксиданты, комплексообразователи, консерванты.
• Регуляторы pH: Поддерживают оптимальное значение pH раствора, что критически важно для стабильности многих активных веществ и предотвращения раздражающего действия на ткани. Буферные системы (например, цитратные, фосфатные буферы) широко применяются для этой цели.
• Регуляторы высвобождения и всасывания: Могут модифицировать кинетику высвобождения активного вещества из лекарственной формы и его последующего всасывания в организме.
• Корригенты: Улучшают органолептические свойства препарата (вкус, запах, цвет), делая его более приемлемым для пациента.

Выбор вспомогательных веществ должен быть тщательно обоснован, поскольку они не должны отрицательно влиять на фармакологическую активность действующего вещества и должны быть химически совместимы с ним. Вспомогательные вещества также определяют агрегатное состояние, реологические свойства (вязкость) и pH среды лекарственного средства, играя ключевую роль в предотвращении таких проблем, как микробная контаминация, которая может возникнуть в водных средах.

Глюконат кальция: структура, свойства и методы синтеза стабильных растворов

Глюконат кальция — это не просто химическое соединение, а жизненно важный препарат, широко применяемый в медицине для коррекции нарушений кальциевого обмена. Его эффективность и безопасность напрямую зависят от свойств субстанции и стабильности его водных растворов. Однако именно стабильность является ахиллесовой пятой этого соединения, что требует глубокого понимания его химии и технологий получения.

Химическая структура и физико-химические характеристики глюконата кальция

Глюконат кальция представляет собой кальциевую соль D-глюконовой кислоты. Его полное химическое название — кальция бис[(2R, 3S, 4R, 5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексаноат] моногидрат, также известный как моногидрат ди-(D-глюконата) кальция.

• Химическая формула: C12H22CaO14·H2O.
• Молекулярная масса: 448,39 г/моль (для моногидрата); 430,4 г/моль (для безводной формы).
• Внешний вид: Белый или почти белый зернистый или кристаллический порошок без запаха.

Растворимость: Этот параметр критически важен для фармацевтических растворов. Глюконат кальция демонстрирует характерную температурно-зависимую растворимость:

• Легко растворим в кипящей воде.
• Умеренно (медленно) растворим в воде при комнатной температуре.
• Мало растворим в холодной воде.
• Практически нерастворим в спирте 96 % и эфире.

Фармакопейные требования к субстанции глюконата кальция строго регламентированы. Для производства нестерильных лекарственных препаратов содержание основного вещества должно быть не менее 98,5 % и не более 102,0 %. Для парентерального применения требования еще строже: не менее 99,0 % и не более 101,0 %.
pH 2%-го водного раствора субстанции глюконата кальция находится в диапазоне от 6,0 до 7,2, что свидетельствует о его слабокислой или нейтральной природе в растворе.

Проблема пересыщенности 10% раствора глюконата кальция и факторы осадкообразования

Одной из главных технологических проблем при производстве глюконата кальция является его низкая истинная растворимость. При комнатной температуре она составляет всего около 3,5 мг/мл, что эквивалентно 3,5%. Это означает, что широко применяемый в клинике 10% раствор глюконата кальция по своей природе является пересыщенным.

Пересыщенные растворы — это термодинамически нестабильные системы. В них концентрация растворенного вещества превышает равновесную растворимость. Такая метастабильность приводит к тому, что при определенных условиях происходит самопроизвольное выделение избыточного количества вещества из раствора в виде осадка.

Помутнение раствора и выпадение осадка кальция глюконата делают препарат непригодным для использования, особенно для инъекционного введения, так как это может привести к эмболии и другим серьезным осложнениям.

Факторы, провоцирующие осадкообразование в 10% растворе глюконата кальция:

• Понижение температуры: Наиболее распространенный фактор. При снижении температуры растворимость глюконата кальция значительно уменьшается, что приводит к быстрому выпадению осадка. Именно поэтому растворы часто хранят при контролируемой комнатной температуре, избегая охлаждения.
• Механические воздействия: Встряхивание, вибрация, перемешивание могут инициировать кристаллизацию, предоставляя дополнительную энергию для образования зародышей кристаллов.
• Внесение затравки: Даже мельчайшие пылинки, частицы стекла или микрокристаллы глюконата кальция, попавшие в пересыщенный раствор, могут стать центрами кристаллизации, ускоряя осадкообразование.
• Длительное хранение: Со временем даже без внешних воздействий в пересыщенном растворе может произойти нуклеация и рост кристаллов, что приводит к помутнению и выпадению осадка.

Таким образом, разработка методов стабилизации является критически важной задачей.

Методы синтеза субстанции глюконата кальция и особенности получения стабильного 10% раствора

Производство глюконата кальция начинается с синтеза самой субстанции, после чего осуществляется приготовление стабильного водного раствора.

1. Получение субстанции глюконата кальция:
Один из распространенных промышленных методов основан на жидкофазном каталитическом окислении глюкозы. Процесс происходит при повышенной температуре в щелочном растворе с использованием гетерогенного катализатора, часто на основе комплексной соли палладия и висмута на углеродном носителе, например, «Сибунит».
В результате окисления глюкозы образуется глюконат натрия. Затем раствор глюконата натрия подвергают процессам эквивалентного гетерогенного и гомогенного ионного обмена для замещения ионов натрия на ионы кальция, с последующей кристаллизацией глюконата кальция из раствора.

2. Получение стабильного 10% раствора для инъекций:
Учитывая проблему пересыщенности и осадкообразования, для получения стабильного 10% раствора глюконата кальция для инъекций используются специальные технологические приемы и вспомогательные вещества:

• Совместное использование с кальция лактатом: Один из наиболее эффективных методов стабилизации заключается в добавлении кальция лактата. Кальция глюконат и кальция лактат (в количестве 10-30% от содержания кальция глюконата) растворяют в очищенной воде при нагревании до 80°С. Оптимальное массовое соотношение кальция глюконат : кальция лактат составляет 10:(1-3). Кальция лактат выступает в роли солюбилизатора и ингибитора кристаллизации, предотвращая выпадение глюконата кальция в осадок.
• Добавление комплексообразующих кислот: Растворимость кальция глюконата существенно возрастает в присутствии таких кислот, как лимонная, яблочная или молочная. Эти кислоты способны образовывать растворимые комплексы с ионами Ca2+, тем самым увеличивая эффективную концентрацию кальция в растворе без образования осадка.
  Например, при добавлении лимонной кислоты в концентрации 23%, растворимость кальция глюконата может достигать 11%, что более чем в 3 раза превышает его истинную растворимость в чистой воде (примерно 3,5%). Это позволяет получить стабильный 10% раствор.
• Термическая обработка: Растворение активных веществ при нагревании до 80°С способствует полному растворению и формированию более стабильной системы.
• Стерилизация: Изготовленный раствор для инъекций подвергается стерилизации насыщенным паром. Типичные режимы стерилизации: температура 120-122 °C под давлением 120 кПа. Для растворов объемом до 100 мл время стерилизации составляет 8 минут. Это обеспечивает микробиологическую чистоту препарата.

Применение этих подходов позволяет преодолеть вызовы, связанные с метастабильностью глюконата кальция, и получить безопасный, эффективный и стабильный препарат.

Фармацевтическая несовместимость глюконата кальция

Помимо физической нестабильности, глюконат кальция обладает рядом фармацевтических несовместимостей, которые необходимо учитывать при его хранении и комбинировании с другими веществами. Эти несовместимости обусловлены образованием нерастворимых или труднорастворимых солей с ионами кальция (Ca2+).

К основным веществам, с которыми глюконат кальция фармацевтически несовместим, относятся:

• Этанол: В присутствии высоких концентраций этанола растворимость глюконата кальция снижается, что может привести к его осаждению.
• Карбонаты: Образуют нерастворимый карбонат кальция (CaCO3), который выпадает в осадок. Это особенно актуально при смешивании с растворами, содержащими карбонаты или бикарбонаты.
• Салицилаты: Некоторые салицилаты могут образовывать труднорастворимые комплексы или соли с ионами кальция.
• Сульфаты: Образуют малорастворимый сульфат кальция (CaSO4). Пример: при смешивании с растворами, содержащими сульфат магния или сульфат натрия.

Эти несовместимости критически важны при назначении внутривенных инфузий, где часто требуется смешивание нескольких препаратов. Всегда следует проверять совместимость глюконата кальция с другими лекарственными средствами перед их совместным введением, чтобы избежать образования осадка, который может быть опасен для пациента.

Современные методы анализа глюконата кальция в водных растворах

Качество и безопасность лекарственных средств напрямую зависят от эффективности аналитических методов, используемых на всех этапах их жизненного цикла – от контроля сырья до оценки стабильности готового препарата. В фармацевтической химии для исследования лекарственных веществ применяется широкий спектр подходов, и глюконат кальция не является исключением. Какие методы позволяют гарантировать чистоту и точность дозировки этого важного препарата?

Обзор методов исследования лекарственных веществ

Методы исследования лекарственных веществ можно классифицировать по их физической основе и характеру получаемой информации:

1. Физические методы: Включают определение таких параметров, как температура плавления, плотность, показатель преломления, вязкость. Они часто используются для первичной идентификации и оценки чистоты.
2. Химические методы: Основаны на химических реакциях с образованием характерных продуктов или изменением свойств раствора. К ним относятся гравиметрический анализ (определение массы осадка), газометрический анализ (измерение объема выделившегося газа) и, конечно, титриметрические (объемные) методы.
3. Физико-химические методы: Сочетают физические принципы с химическими реакциями или свойствами. Это обширная группа, включающая спектрофотометрию (УФ, ИК, атомно-абсорбционная), хроматографию (ТСХ, ВЭЖХ, ГЖХ), электрохимические методы (pH-метрия, кондуктометрия, потенциометрия).
4. Биологические методы: Используются для оценки биологической активности, токсичности, пирогенности и стерильности, особенно для препаратов биологического происхождения или тех, где физико-химические методы не дают полной картины.

В фармацевтическом анализе титриметрические (объемные) методы занимают одно из ведущих мест. Их популярность обусловлена меньшей трудоемкостью по сравнению с гравиметрией, высокой точностью и возможностью выполнения рутинных анализов в условиях контроля качества. Они основаны на точном измерении объема раствора реактива известной концентрации (титранта), который вступает в стехиометрическую реакцию с анализируемым веществом.

Качественное определение глюконата кальция: фармакопейные и дополнительные методы

Качественный анализ направлен на подтверждение подлинности активного вещества. Для глюконата кальция Государственная Фармакопея и другие нормативные документы предусматривают несколько надежных методов.

1. ИК-спектрометрия: Это один из наиболее специфичных и информативных методов. Инфракрасный спектр субстанции глюконата кальция должен быть идентичен спектру фармакопейного стандартного образца. Метод основан на поглощении ИК-излучения молекулами, что вызывает колебания связей. Каждый функциональный группа имеет характерный «отпечаток» в ИК-спектре, позволяя идентифицировать вещество по его уникальному набору колебаний.
2. Качественная реакция на глюконат-ион:
   • С раствором железа(III) хлорида (FeCl3): При добавлении раствора FeCl3 к раствору глюконата кальция наблюдается появление характерного светло-зеленого окрашивания. Эта реакция является специфичной для α-гидроксикарбоновых кислот, к которым относится глюконовая кислота.
   • Принцип реакции: Ионы железа(III) образуют с глюконат-ионами растворимые комплексы, имеющие характерный цвет.
3. Характерные реакции на ион кальция (Ca2+):
   • С раствором аммония оксалата ((NH4)2C2O4): При добавлении раствора аммония оксалата к раствору, содержащему ионы кальция, образуется белый осадок кальция оксалата (CaC2O4), который нерастворим в уксусной кислоте, но растворим в минеральных кислотах (HCl, HNO3).
   • Принцип реакции: Ca2+ + (NH4)2C2O4 → CaC2O4↓ + 2NH4+
   • С пламенем: Соли кальция окрашивают пламя в кирпично-красный цвет.
4. Хроматография в тонком слое (ТСХ): Этот метод также применяется для качественного определения глюконата кальция и контроля его чистоты.
   • Принцип: Разделение компонентов смеси происходит за счет их различной адсорбции на стационарной фазе (слой сорбента на пластинке) и разной скорости перемещения с подвижной фазой (растворителем).
   • Методика: На хроматографическую пластинку (например, с силикагелем) наносят испытуемый раствор и раствор стандартного образца. После элюирования в подходящей системе растворителей хроматограмму проявляют раствором калия дихромата в серной кислоте. Глюконат кальция проявляется в виде характерного пятна с определенным значением R_f, которое должно совпадать со стандартным образцом.

Количественное определение глюконата кальция методом комплексонометрии

Для точного количественного определения содержания глюконата кальция в субстанции и растворах наиболее распространенным и фармакопейным методом является комплексонометрическое титрование.

Принцип комплексонометрии:
Метод основан на образовании прочных, растворимых в воде, окрашенных или бесцветных комплексов полиаминокарбоновых кислот (комплексонов), таких как этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) или ее динатриевая соль (Трилон Б), с ионами металлов. В случае глюконата кальция, Трилон Б (Na2H2ЭДТА) образует устойчивый комплекс с ионами кальция (Ca2+).

Ca2+ + [H2ЭДТА]2- → [CaЭДТА]2- + 2H+

Титрование проводят в щелочной среде, чтобы обеспечить полную ионизацию Трилона Б и образование устойчивых комплексов, а также предотвратить осаждение гидроксида кальция. Конец титрования фиксируют с помощью металлоиндикаторов, которые образуют с ионами металла менее прочные, но ярко окрашенные комплексы. При добавлении Трилона Б он сначала связывает свободные ионы Ca2+, а затем вытесняет ионы Ca2+ из комплекса с индикатором, вызывая резкое изменение окраски раствора.

Фармакопейная методика количественного определения кальция глюконата (пример):

1. Навеска: Точную навеску субстанции кальция глюконата (около 0,35-0,4 г) помещают в коническую колбу для титрования.
2. Растворение: Навеску растворяют в 20 мл воды при нагревании, чтобы обеспечить полное растворение глюконата кальция.
3. Охлаждение: Раствор охлаждают до комнатной температуры.
4. Добавление буферного раствора и индикатора: Добавляют 10 мл аммиачного буферного раствора (или 10 мл аммиачного буферного раствора и разбавляют водой до 300 мл, чтобы обеспечить оптимальную концентрацию для индикатора и видимость перехода окраски). Затем добавляют несколько капель индикатора хромового темно-синего. В присутствии ионов кальция раствор приобретает красно-фиолетовый цвет.
5. Титрование: Титруют 0,1 М или 0,05 М раствором натрия эдетата (Трилона Б) до резкого перехода окраски из красно-фиолетовой в сине-фиолетовую.

Расчет содержания глюконата кальция:
Массовая доля кальция глюконата (X) в процентах рассчитывается по формуле:

X = (VЭДТА × TЭДТА × 100) / m

Где:

• VЭДТА — объем 0,05 М раствора натрия эдетата, израсходованного на титрование (мл).
• TЭДТА — титр по глюконату кальция, то есть масса глюконата кальция, соответствующая 1 мл 0,05 М раствора натрия эдетата.
• m — масса навески субстанции глюконата кальция (г).

Эквивалент:
1 мл 0,05 М раствора натрия эдетата (Трилона Б) соответствует 22,42 мг кальция глюконата C12H22CaO14·H2O.

Этот метод обеспечивает высокую точность и воспроизводимость, что делает его стандартом для контроля качества глюконата кальция.

Контроль чистоты и допустимых примесей

Помимо основного содержания, крайне важным аспектом является контроль чистоты субстанции глюконата кальция, который регламентируется фармакопейными статьями. Наличие примесей может влиять на стабильность, безопасность и терапевтическую эффективность препарата. Ведь даже малейшие загрязнения способны непредсказуемо изменить его свойства.

Допустимые примеси:

• Медь и Железо: Эти ионы тяжелых металлов могут выступать в качестве катализаторов окислительных процессов, снижая стабильность препарата. Их содержание строго нормируется и определяется колориметрическими методами.
• Щавелевая кислота: Продукты деградации или исходные компоненты синтеза. Определяется качественными реакциями или хроматографическими методами.
• Тяжелые металлы: Общая группа токсичных элементов (свинец, кадмий, ртуть и др.), которые контролируются по общему показателю с использованием сульфидного реагента или инструментальными методами (например, атомно-абсорбционная спектрометрия).

Недопустимые примеси:

• Декстрин и Сахароза: Это продукты неполного окисления глюкозы или контаминанты. Их присутствие указывает на несоблюдение технологического процесса или использование некачественного сырья. Методы их обнаружения основаны на специфических реакциях с этими углеводами, например, качественные реакции на восстанавливающие сахара.

Дополнительные параметры контроля чистоты и свойств:

• Определение pH: pH 2%-го водного раствора субстанции глюконата кальция должен находиться в пределах 6,0-7,2. Отклонение от этого диапазона может свидетельствовать о наличии примесей кислотного или щелочного характера или о начале деградации. pH измеряется с помощью pH-метра.
• Потеря в массе при высушивании: Определяется для контроля содержания воды в субстанции (гигроскопичность, содержание кристаллизационной воды).
• Сульфатная зола: Показатель неорганических примесей.

Комплексный подход к контролю чистоты гарантирует, что в производство поступает субстанция высокого качества, соответствующая всем фармакопейным требованиям.

Исследование стабильности водных растворов глюконата кальция и условия хранения

Стабильность лекарственного препарата — это его способность сохранять свои физико-химические, химические, микробиологические и биофармацевтические свойства в пределах установленных норм на протяжении всего срока годности при соблюдении условий хранения. Для 10% раствора глюконата кальция, обладающего метастабильным характером, исследования стабильности приобретают особую значимость, поскольку от них напрямую зависит безопасность и эффективность препарата.

Концепция стабильности лекарственных средств и метастабильность глюконата кальция

Целью проведения исследований стабильности является получение данных об изменениях качества активной фармацевтической субстанции (АФС) или готового лекарственного препарата с течением времени. Эти изменения могут быть вызваны различными факторами окружающей среды, такими как температура, влажность, свет, а также pH среды, присутствие катализаторов или микроорганизмов. На основе полученных данных устанавливаются:

• Рекомендуемые условия хранения: Например, хранение в защищенном от света месте, при определенной температуре.
• Период повторных исследований: Для стабильных АФС.
• Срок годности: Для АФС или лекарственных препаратов, который определяет период, в течение которого препарат гарантированно сохраняет свои качества.

Как уже упоминалось, 10% раствор глюконата кальция является метастабильным. Это означает, что он находится в термодинамически неравновесном состоянии, где растворенное вещество превышает свою истинную растворимость. В таком состоянии раствор может существовать довольно долго, но является чувствительным к внешним воздействиям, которые могут спровоцировать кристаллизацию.

Причины осадкообразования в метастабильном растворе:

• Понижение температуры: Уменьшает растворимость глюконата кальция, смещая равновесие в сторону образования твердой фазы.
• Механические воздействия: Встряхивание, вибрация, интенсивное перемешивание, ультразвук — все это может инициировать формирование зародышей кристаллов.
• Внесение затравки: Присутствие мельчайших частиц (пыли, кристаллов), которые могут служить центрами для роста новых кристаллов.

Помутнение раствора и выпадение глюконата кальция в осадок делают препарат непригодным для использования, особенно для парентерального введения, из-за риска эмболии.

Факторы, влияющие на физико-химическую и химическую стабильность

Стабильность растворов глюконата кальция — это комплексный показатель, который зависит от множества внешних и внутренних факторов, и их взаимодействие определяет конечное качество препарата.

1. Температура: Является одним из наиболее критичных факторов. Повышенная температура ускоряет химические реакции деградации (например, гидролиз глюконата), тогда как пониженная температура, напротив, способствует физической нестабильности — снижению растворимости и выпадению осадка в пересыщенных растворах. Оптимальный температурный режим хранения часто находится в узком диапазоне, поэтому температурный контроль так важен.
2. Свет: Ультрафиолетовое и видимое излучение могут инициировать фотохимические реакции, приводящие к окислению, деградации или изменению цвета раствора. Поэтому растворы часто хранят в упаковке из темного стекла или в защищенном от света месте.
3. Время хранения: С течением времени даже в идеальных условиях хранения происходит медленная деградация. Исследования стабильности призваны определить максимально допустимый срок хранения, при котором препарат соответствует всем требованиям качества.
4. pH среды: Уровень кислотности или щелочности раствора значительно влияет на стабильность глюконата кальция. Слишком кислая среда может способствовать гидролизу глюконат-иона, а слишком щелочная — образованию гидроксида кальция. Поддержание оптимального pH (для глюконата кальция в растворе для инъекций это 6,0-8,2) с помощью буферных систем критически важно.
5. Концентрация: Высокие концентрации (как в случае 10% раствора глюконата кальция) увеличивают риск физической нестабильности (осадкообразования).
6. Наличие примесей: Ионы тяжелых металлов (медь, железо) могут выступать в качестве катализаторов окислительных процессов. Органические примеси, такие как декстрин или сахароза, могут быть субстратами для микробиологического роста или участвовать в нежелательных химических реакциях.
7. Упаковка: Материал и тип упаковки (стекло, полимеры) влияют на газопроницаемость, светопроницаемость и возможность взаимодействия с раствором (выщелачивание, адсорбция). Плотно укупоренная упаковка необходима для предотвращения испарения растворителя и микробной контаминации.

Эти факторы комплексно изучаются в программах исследования стабильности, чтобы полностью охарактеризовать поведение лекарственного средства.

Регуляторные требования и программы исследования стабильности

Исследования стабильности лекарственных средств строго регламентируются национальными и международными нормативными документами, такими как Общая фармакопейная статья (ОФС) ГФ XII «Сроки годности лекарственных средств» и Требования Евразийского экономического союза к исследованию стабильности. Эти документы устанавливают общие принципы и методологию проведения исследований, что обеспечивает единообразие и сопоставимость результатов.

Основные режимы хранения, используемые в исследованиях стабильности:

1. Долгосрочное исследование:
   • Условия: 25 ± 2 °С и 60 ± 5% относительной влажности (ОВ).
   • Длительность: Продолжается в течение всего предлагаемого срока годности препарата (например, 12, 24, 36 месяцев).
   • Значение: Является обязательным и служит для подтверждения срока годности и условий хранения. Результаты должны быть доступны регуляторному органу.
2. Промежуточное исследование:
   • Условия: 30 ± 2 °С и 60/65 ± 5% ОВ.
   • Длительность: Обычно проводится, если по результатам ускоренных исследований наблюдаются значительные изменения, и необходимо получить дополнительные данные.
3. Ускоренное исследование:
   • Условия: 40 ± 2 °С и 75 ± 5% ОВ.
   • Длительность: Минимум 6 месяцев.
   • Значение: Позволяет быстро оценить химическую стабильность препарата и предсказать его поведение в течение длительного времени. Не всегда полностью отражает физическую стабильность, особенно для метастабильных систем.

Частота контроля показателей качества:
Образцы лекарственных средств, находящиеся на изучении стабильности, подлежат проверке по всем показателям качества, указанным в нормативной документации, со следующей периодичностью:

• В течение первого года хранения: каждые 3 месяца.
• В течение второго и третьего года хранения: каждые 6 месяцев.
• После третьего года хранения: ежегодно (каждые 12 месяцев).

Важные аспекты:

• Срок годности лекарственных препаратов устанавливается независимо от сроков годности фармацевтических субстанций, так как в составе готовой формы могут быть дополнительные факторы нестабильности.
• Хранение субстанции кальция глюконата рекомендуется в плотно укупоренной упаковке для защиты от влаги и воздействия окружающей среды.
• Исследования стабильности 10% раствора глюконата кальция включают изучение влияния сроков хранения, пониженной температуры, механического воздействия, а также циклов замораживания и размораживания, что особенно актуально для метастабильных систем.

Строгое соблюдение этих требований позволяет установить научно обоснованные сроки годности и условия хранения, гарантируя безопасность и эффективность препарата для пациентов.

Контроль качества и валидация аналитических методик

Контроль качества является неотъемлемой частью жизненного цикла любого фармацевтического продукта, гарантируя, что препарат соответствует установленным спецификациям и безопасен для применения. Для растворов глюконата кальция, особенно инъекционных, этот процесс включает проверку целого ряда критических параметров. Параллельно с контролем качества идет процесс валидации аналитических методик, подтверждающий их пригодность для предполагаемого использования.

Показатели качества растворов глюконата кальция для инъекций

Раствор кальция глюконата для инъекций должен соответствовать строгим требованиям Государственной Фармакопеи и нормативной документации. Ниже приведены основные показатели качества:

1. Прозрачность и цветность:
   • Требования: Раствор должен быть прозрачной бесцветной или слегка желтоватой жидкостью. Любое помутнение или изменение цвета свидетельствует о деградации или образовании примесей.
   • Методика: Проверяются в соответствии с Общими фармакопейными статьями (ОФС) «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей» и «Степень окраски жидкостей». Это обычно включает визуальное сравнение с эталонными растворами или стандартами мутности в проходящем свете.
2. pH раствора:
   • Требования: pH раствора кальция глюконата для инъекций должен находиться в диапазоне от 6,0 до 8,2. Отклонение от этого диапазона может влиять на стабильность активного вещества и вызывать дискомфорт или повреждение тканей при инъекции.
   • Методика: Измеряется с помощью калиброванного pH-метра.
3. Механические включения:
   • Требования: Категорически недопустимы для инъекционных растворов, так как могут вызвать эмболию. Различают видимые (обнаруживаются визуально) и невидимые (микрочастицы, требующие инструментального контроля) включения.
   • Методика: Визуальный контроль проводится при определенном освещении. Контроль невидимых включений осуществляется с использованием счетчиков частиц (например, оптических или лазерных).
4. Извлекаемый объем:
   • Требования: Объем препарата, который может быть извлечен из флакона или ампулы, должен соответствовать номинальному объему с допустимыми отклонениями, чтобы обеспечить точное дозирование.
   • Методика: Измеряется путем переноса содержимого нескольких упаковок в мерный цилиндр.
5. Бактериальные эндотоксины:
   • Требования: Инъекционные растворы должны быть апирогенны, то есть не содержать бактериальных эндотоксинов, которые могут вызвать лихорадку и шок.
   • Методика: Определяется с использованием лизата амебоцитов мечехвоста (Лал-тест).
6. Аномальная токсичность:
   • Требования: Проверка на общую токсичность, которая не может быть выявлена другими методами.
   • Методика: Биологический тест, проводимый на лабораторных животных (мышах).

Соответствие всем этим показателям является обязательным условием для выпуска инъекционного раствора глюконата кальция на рынок.

Принципы валидации аналитических методик

Аналитическая методика — это подробное, документированное описание последовательности действий, необходимых для выполнения аналитического испытания. Оно включает все этапы: от подготовки испытуемых и стандартных образцов, реактивов, использования оборудования, до построения градуировочных кривых и формул для расчета результатов.

Валидация метода — это процесс подтверждения того, что аналитическая методика пригодна для ее предполагаемого использования. Это систематическое исследование, которое определяет и проверяет уровень эффективности метода с помощью его эксплуатационных параметров. Валидация является критически важной для обеспечения достоверности и надежности результатов, получаемых при контроле качества и в исследованиях стабильности.

Ключевые валидационные параметры для методик количественного определения:

1. Линейность: Способность методики давать результаты, которые прямо пропорциональны концентрации анализируемого вещества в заданном диапазоне.
   • Как проверяется: Построение градуировочной кривой путем анализа серии стандартов с различными концентрациями и оценка коэффициента корреляции (r), который должен быть близок к 1 (например, ≥ 0,999).
2. Правильность (Accuracy): Степень близости полученных результатов к истинному или принятому опорному значению.
   • Как проверяется: Анализ образцов с известной концентрацией (например, стандартных образцов) или методом добавок. Результаты выражаются в процентах извлечения.
3. Воспроизводимость (Precision – Reproducibility): Близость результатов, полученных при анализе одной и той же гомогенной пробы в различных условиях (разные лаборатории, аналитики, оборудование, дни).
   • Как проверяется: Межлабораторные сравнительные испытания. Результаты выражаются через относительное стандартное отклонение (RSD) или коэффициент вариации.
   • Пример: Валидированная титриметрическая методика количественного определения кальция глюконата в геле показала стандартное отклонение среднего значения 0,348 % и коэффициент корреляции 0,9999, что свидетельствует о ее высокой точности и линейности.

Другие важные параметры валидации включают: специфичность (селективность), предел обнаружения (LOD), предел количественного определения (LOQ), диапазон и устойчивость (Robustness). Валидированные методики обеспечивают надежность данных, используемых для принятия решений о качестве и стабильности лекарственных средств.

Метод крайних вариантов (bracketing) в исследованиях стабильности

В исследованиях стабильности, особенно когда речь идет о сериях лекарственных препаратов с различными дозировками, размерами упаковки или составом, проведение полных исследований для каждой серии может быть чрезвычайно ресурсоемким. Для оптимизации таких исследований применяется метод крайних вариантов (bracketing).

Принцип метода bracketing:
Это составление плана исследования стабильности, при котором полному исследованию (по всем показателям и во всех временных точках контроля) подвергаются только образцы с крайними (предельными) значениями определенных факторов в ряду.
Например, если препарат выпускается в дозировках 5 мг, 10 мг и 20 мг, и в упаковках 10 мл, 50 мл и 100 мл, то по методу bracketing исследованию будут подвергаться только комбинации:

• Минимальная дозировка + минимальная упаковка (например, 5 мг / 10 мл)
• Минимальная дозировка + максимальная упаковка (например, 5 мг / 100 мл)
• Максимальная дозировка + минимальная упаковка (например, 20 мг / 10 мл)
• Максимальная дозировка + максимальная упаковка (например, 20 мг / 100 мл)

При этом предполагается, что стабильность образцов с промежуточными значениями факторов (например, 10 мг или упаковка 50 мл) будет аналогична или лучше, чем стабильность образцов с крайними значениями, которые показали наименьшую стабильность.

Применение в исследованиях глюконата кальция:
Для растворов глюконата кальция этот метод может быть применен, если препарат выпускается в различных концентрациях (хотя 10% является наиболее распространенной), в разных объемах флаконов или ампул, или если в его состав входят стабилизирующие добавки в различных концентрациях.

Метод bracketing позволяет значительно сократить объем исследований и количество анализируемых образцов, не снижая при этом надежности оценки стабильности, при условии, что этот подход научно обоснован и одобрен регуляторными органами.

Статистические методы анализа данных в исследованиях стабильности

Для того чтобы результаты исследований стабильности были научно обоснованными и позволяли принимать достоверные решения о сроках годности лекарственных средств, необходимо применять адекватные статистические методы анализа данных. Статистика выступает в качестве моста между экспериментальными наблюдениями и надежными выводами, позволяя оценить значимость изменений и спрогнозировать поведение препарата во времени.

Дисперсионный анализ (ANOVA) в оценке стабильности

Дисперсионный анализ (ANOVA, от англ. ANalysis Of VAriance) — это мощный метод в математической статистике, разработанный Р. Фишером, который позволяет исследовать зависимости в экспериментальных данных путем изучения значимости различий между средними значениями двух или более групп. В отличие от t-критерия Стьюдента, который сравнивает только две группы, ANOVA способен одновременно анализировать средние значения трех и более групп, что делает его незаменимым инструментом для многофакторных исследований стабильности.

Суть дисперсионного анализа:
ANOVA направлен на изучение влияния одной или нескольких независимых переменных (факторов, таких как температура, время хранения, тип упаковки) на зависимую переменную (например, содержание активного вещества, pH, прозрачность). Основная идея заключается в разделении общей вариации (дисперсии) данных на компоненты, связанные с влиянием факторов и компоненты, обусловленные случайными ошибками.

Основные типы дисперсионного анализа:

1. Однофакторный ANOVA: Используется, когда анализируется влияние одной независимой переменной (фактора) на зависимую.
   • Пример: Сравнение стабильности глюконата кальция при трех разных температурах хранения (25°C, 30°C, 40°C).
2. Двухфакторный ANOVA: Применяется, когда исследуется влияние двух независимых переменных и их взаимодействия на зависимую переменную.
   • Пример: Оценка влияния температуры хранения и типа упаковки на скорость деградации глюконата кальция.
3. ANOVA с повторными измерениями: Используется, когда измерения зависимой переменной проводятся на одних и тех же объектах в разные моменты времени (например, контроль стабильности одного и того же образца глюконата кальция через 3, 6, 9 месяцев).
4. Анализ категориальных данных: Хотя ANOVA чаще применяется для количественных данных, существуют его модификации или сопутствующие тесты для анализа влияния факторов на категориальные признаки (например, изменение прозрачности – «прозрачный», «слегка опалесцирующий», «мутный»).

F-критерий Фишера:
При выполнении дисперсионного анализа ключевым показателем является F-критерий Фишера. Он представляет собой отношение межгрупповой дисперсии (вариации, объясняемой влиянием фактора) к внутригрупповой дисперсии (случайной вариации).

F = (Межгрупповая дисперсия) / (Внутригрупповая дисперсия)

Если значение F-критерия превышает критическое значение (определяемое по F-распределению Фишера для заданных степеней свободы и уровня значимости), то делается вывод о статистически значимом влиянии фактора на зависимую переменную, то есть, что различия между средними значениями групп не случайны.

Критерии множественных сравнений:
Если ANOVA показывает, что существует статистически значимое различие между средними значениями групп, возникает вопрос: какие именно группы отличаются друг от друга? Для этого используются критерии множественных сравнений (post-hoc тесты), которые позволяют проводить попарные сравнения между группами без увеличения вероятности ошибки I рода. К ним относятся:

• Методы по Бонферрони: Очень консервативный метод, снижающий вероятность ошибки, но увеличивающий вероятность ошибки II рода.
• Методы по Ньюмену–Кейлсу: Менее консервативный, чем Бонферрони, используется для сравнения всех возможных пар средних.
• Методы по Даннету: Применяется для сравнения средних всех экспериментальных групп со средней контрольной группы.
• Методы по Шеффе: Подходит для сравнения любых возможных комбинаций групп, наиболее гибкий, но и самый консервативный.

Применение ANOVA позволяет установить, какие факторы (температура, свет, упаковка, состав) оказывают значимое влияние на стабильность глюконата кальция, что критически важно для оптимизации условий хранения и формуляции.

Регрессионный анализ для определения срока годности

Регрессионный анализ является основным методом для определения срока годности лекарственных средств. Этот метод позволяет установить математическую зависимость между показателем качества (например, содержанием активного вещества) и временем хранения, а затем экстраполировать эту зависимость до момента, когда показатель качества достигнет установленного предела. Таким образом, можно предсказать, сколько времени препарат сохранит свои свойства.

Принцип регрессионного анализа:
Строится модель, описывающая изменение показателя качества (зависимая переменная, Y) как функцию времени (независимая переменная, X). Наиболее часто используется линейная регрессия, но при нелинейном характере деградации могут применяться полиномиальные или другие нелинейные модели.

Y = aX + b (для линейной модели)

Где:

• Y — значение показателя качества в момент времени X.
• X — время хранения.
• a — наклон кривой (скорость изменения показателя качества).
• b — начальное значение показателя качества.

На основе этой модели можно предсказать, когда значение показателя качества выйдет за допустимые пределы, что и определяет срок годности.

Важные аспекты применения регрессионного анализа:

1. Объединение данных для разных серий: При проведении регрессионного анализа рекомендуется проводить статистический анализ для определения возможности объединения данных, полученных для разных серий лекарственного средства. Если данные разных серий статистически неразличимы (например, по наклону и пересечению регрессионной прямой), их можно объединить для построения единой модели, что повышает надежность прогноза. Уровень значимости, часто используемый для принятия решения об объединении данных, составляет 0,25. Если p-значение для сравнения наклонов и/или пересечений меньше 0,25, данные не могут быть объединены.
2. Преобразование данных: Необходимость преобразования данных (например, логарифмирование, возведение в степень) для проведения линейного регрессионного анализа зависит от характера закономерности деградации. Если деградация протекает по кинетике первого порядка, то логарифм концентрации будет линейно зависеть от времени. Правильный выбор преобразования данных позволяет применить более простые и надежные методы линейной регрессии.
3. Доверительные интервалы: При определении срока годности на основе регрессионной модели обязательно строятся доверительные интервалы для предсказанных значений. Срок годности устанавливается по нижней границе 95% доверительного интервала для показателя качества, чтобы обеспечить максимальную консервативность и безопасность.

Применение статистических методов для оценки достоверности результатов

Статистические методы играют ключевую роль в оценке достоверности и надежности всех экспериментальных результатов в фармацевтике. Они позволяют:

• Оценить степень соответствия выбранной математической модели экспериментальным данным. Например, с помощью коэффициента детерминации (R2) можно понять, какую долю вариации зависимой переменной объясняет выбранная модель.
• Сравнить группы образцов: Используя t-критерий, ANOVA, критерий Манна-Уитни, можно определить, являются ли наблюдаемые различия между группами статистически значимыми или случайными.
• Выявить выбросы: Статистические тесты помогают идентифицировать аномальные значения, которые могут быть результатом ошибок измерения или необычных событий.
• Определить взаимосвязи: Корреляционный анализ позволяет количественно оценить степень и направление линейной связи между двумя переменными.
• Планировать эксперименты: Статистические принципы используются для разработки оптимальных планов экспериментов, что позволяет получить максимальное количество информации при минимальных затратах ресурсов.

В контексте исследований стабильности глюконата кальция статистические методы обеспечивают объективную оценку влияния условий хранения на качество препарата, позволяют прогнозировать его поведение за пределами экспериментального периода и, в конечном итоге, гарантировать безопасность и эффективность лекарственного средства на протяжении всего его срока годности. Это фундаментальная основа для принятия регуляторных решений и обеспечения качества фармацевтической продукции.

Заключение

Исследование особенностей водных растворов глюконата кальция является многогранной задачей, требующей глубоких знаний в области фармацевтической, аналитической и физической химии. Проделанная работа позволила систематизировать и углубить понимание ключевых аспектов, связанных с этим важным лекарственным средством, начиная от его фундаментальных физико-химических свойств и заканчивая сложными вопросами стабилизации и статистического анализа.

Мы увидели, что глюконат кальция, будучи кальциевой солью D-глюконовой кислоты, представляет собой белый кристаллический порошок, чья истинная растворимость в воде составляет всего около 3,5 мг/мл. Этот факт обуславливает ключевую проблему: 10% раствор глюконата кальция является пересыщенным и метастабильным, что делает его крайне чувствительным к таким факторам, как понижение температуры, механические воздействия и наличие центров кристаллизации, приводящим к помутнению и выпадению осадка. Это существенно ограничивает его хранение и применение без специальных мер стабилизации.

Для решения этой проблемы критически важными оказались методы стабилизации. Детально рассмотрено применение кальция лактата в массовом соотношении 10:(1-3) к глюконату кальция, а также роль органических кислот, таких как лимонная, молочная и яблочная, которые образуют растворимые комплексы с ионами кальция, существенно повышая его растворимость. Технологические режимы, такие как нагревание до 80°С и стерилизация насыщенным паром при 120-122°С, также играют важную роль в получении стабильных инъекционных форм. Кроме того, была подчеркнута фармацевтическая несовместимость глюконата кальция с этанолом, карбонатами, салицилатами и сульфатами, что требует особого внимания при его применении и смешивании с другими препаратами.

Аналитический контроль качества глюконата кальция основывается на комплексе фармакопейных методов. Для качественного определения используются ИК-спектрометрия, специфические реакции на глюконат-ион (с FeCl3) и ион кальция (с оксалатом аммония), а также ТСХ. Количественное определение осуществляется высокоточным комплексонометрическим титрованием с использованием 0,05 М раствора натрия эдетата (Трилона Б) и индикатора хромового темно-синего, позволяющего определить содержание глюконата кальция с высокой воспроизводимостью. Были также рассмотрены требования к контролю чистоты, включая определение допустимых (медь, железо, щавелевая кислота, тяжелые металлы) и недопустимых (декстрин, сахароза) примесей, что гарантирует безопасность препарата.

Особое внимание уделено исследованиям стабильности, регламентируемым Общей фармакопейной статьей ГФ XII. Были систематизированы факторы, влияющие на физико-химическую и химическую стабильность (температура, свет, время, pH, концентрация, примеси), и описаны стандартные режимы исследований (долгосрочное, промежуточное, ускоренное) с учетом периодичности контроля. Для контроля качества растворов глюконата кальция для инъекций ключевыми показателями являются прозрачность, цветность, pH, отсутствие механических включений, извлекаемый объем, а также тест на бактериальные эндотоксины и аномальную токсичность, что обеспечивает полное соответствие клиническим требованиям.

Наконец, подчеркнута критическая роль валидации аналитических методик (по линейности, правильности, воспроизводимости) и применения статистических методов анализа данных, таких как дисперсионный (ANOVA) и регрессионный анализ. ANOVA позволяет выявить значимые факторы, влияющие на стабильность, а регрессионный анализ является основным инструментом для научно обоснованного определения срока годности препарата, с учетом возможности объединения данных различных серий и необходимости преобразования данных для линейной модели. Именно эти методы позволяют принимать обоснованные решения о сроках хранения и условиях использования препарата.

В целом, представленная курсовая работа демонстрирует комплексный подход к изучению водных растворов глюконата кальция, подчеркивая взаимосвязь между его химическими свойствами, технологией производства, методами анализа и требованиями к стабильности. Полученные знания не только углубляют понимание химической и фармацевтической сути препарата, но и служат основой для дальнейших исследований по совершенствованию его состава, технологии производства и методов контроля качества, что в конечном итоге способствует обеспечению безопасности и эффективности лекарственных средств для пациентов.

Список использованной литературы

1. Беликов, В. Г. Фармацевтическая химия : учеб. пособие / В. Г. Беликов. — 4-е изд., перераб. и доп. — М. : МЕДпресс-информ, 2007. — 622 с.
2. Вайсман, В. А. Регламент производства инъекционного глюконата кальция. — Белгород, 1993. — С. 155.
3. Глущенко, Н. Н. Фармацевтическая химия: учебник / Н. Н. Глущенко, Т. В. Плетнева, В. А. Попков; под ред. Т. В. Плетневой. – М.: Академия, 2004. – 384 с.
4. Государственная фармакопея Российской Федерации. XII издание. Часть 1. – М.: Научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2008. – 704 с.
5. Международная фармакопея. – 3-е изд., Т. 2. Спецификация для контроля качества фармацевтических препаратов. – М.: Наука, 1990. – 364 с.
6. Фармацевтическая химия: учебное пособие / под ред. А. П. Арзамасцева. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. – 640 с.
7. Забозлаев, А. А. Методы синтеза и технологии лекарственных средств / А. А. Забозлаев, Э. Т. Оганесян // Химико-фармацевтический журнал. – 2007. – Т. 41, № 7. – С. 32-35.
8. Бычковская, Т. В. Разработка технологии получения и биофармацевтическое исследование мягкого лекарственного средства «Гель кальция глюконата 2,5%» / Т. В. Бычковская, О. М. Хишова // Вестник фармации. – 2011. – № 1 (51). – С. 46-51.
9. Громова, О. А. Сравнительный анализ растворимости различных препаратов кальция в зависимости от кислотности среды / О. А. Громова, А. Ю. Волков, И. Ю. Торшин [и др.] // Врач. – 2013. – № 7. – С. 18–24.
10. Щенников, С. В. Современные каталитические технологии в синтезе аскорбиновой кислоты и глюконата кальция / С. В. Щенников, Э. М. Сульман, М. Г. Сульман, В. Г. Матвеева // Вестник Тверского государственного университета. – 2011. – № 12. – С. 172-178.
11. Рыкунова, И. П. Изучение влияния кислот и солей на растворимость кальция глюконата и разработка его стабильного 10%-ного раствора: автореф. дис. канд. фарм. наук (15.00.02) / И. П. Рыкунова. – М., 2007. – 24 с.
12. Способ получения раствора глюконата кальция 10%-ного для инъекций: пат. RU 2287988. URL: http://www.findpatent.ru/patent/228/2287988.html.
13. Стабильный водный раствор кальция глюконата для инъекций: пат. RU 2481831. URL: http://www.findpatent.ru/patent/248/2481831.html.
14. Кальция глюконат. Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание. – 2025. URL: https://www.consultant.ru/document/cons_doc_LAW_414168/.
15. Кальция глюконат. Фармакопейная статья. Министерство здравоохранения Российской Федерации. URL: https://www.rosminzdrav.ru/ministry/o-ministerstve/departament-gosudarstvennogo-regulirovaniya-obrashcheniya-lekarstvennyh-sredstv/doc/7798-fs-kaltsiya-glyukonat-stabilizirovannyy-rastvor-dlya-inektsiy.
16. Способ получения стабильного раствора кальция глюконата для инъекций: пат. RU 2332994C1. Google Patents. URL: https://patents.google.com/patent/RU2332994C1/ru.
17. Изучение растворимости кальция глюконата и стабильности его растворов. – 2015. URL: https://elar.urfu.ru/bitstream/10995/30919/1/m_f_2015_053.pdf.
18. Требования к исследованию стабильности лекарственных препаратов и фармацевтических субстанций Евразийского экономического союза. Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 10 мая 2018 г. № 69. URL: https://www.eurasiancommission.org/ru/act/texnreg/deptexreg/farm/Documents/trebovaniya_stabilnost.pdf.
19. Валидация методики количественного определения кальция глюконата в геле кальция глюконата 2,5%. КиберЛенинка. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/validatsiya-metodiki-kolichestvennogo-opredeleniya-kaltsiya-glyukonata-v-gele-kaltsiya-glyukonata-2-5.
20. ПОЛУЧЕНИЕ СТАБИЛЬНОГО РАСТВОРА ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА «КАЛЬЦИЯ ГЛЮКОНАТ» И ЕГО ИЗУЧЕНИЕ. КиберЛенинка. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/poluchenie-stabilnogo-rastvora-lekarstvennogo-preparata-kaltsiya-glyukonat-i-ego-izuchenie.
21. Глюконат кальция — инструкция к применению лекарственного средства. Vidal.ru. URL: https://www.vidal.ru/drugs/calcii_gluconas__38308.
22. Валидация аналитических методик. РегМед.ру. URL: https://www.regmed.ru/farmakopeya/ofs-1-2-1-0004-15.
23. Применение дисперсионного анализа в экспериментальной фармакологии. Фармакокинетика и Фармакодинамика. URL: https://pharmacokinetica.ru/articles/primenenie-dispersionnogo-analiza-v-eksperimentalnoy-farmakologii.html.
24. Дисперсионный анализ (ANOVA) — мощный инструмент анализа данных в науке, фармакологии и … маркетинговых исследованиях! Дзен. URL: https://dzen.ru/a/YG13S26L_QYJk16w.
25. Дисперсионный анализ. Википедия. URL: https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%94%D0%B8%D1%81%D0%BF%D0%B5%D1%80%D1%81%D0%B8%D0%BE%D0%BD%D0%BD%D1%8B%D0%B9_%D0%B0%D0%BD%D0%B0%D0%BB%D0%B8%D0%B7.
26. Разработка технологии получения и биофармацевтическое исследование мягкого лекарственного средства «Гель кальция глюконата 2,5%». КиберЛенинка. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/razrabotka-tehnologii-polucheniya-i-biofarmatsevticheskoe-issledovanie-myagkogo-lekarstvennogo-sredstva-gel-kaltsiya-glyukonata-2-5.
27. Жидкие лекарственные формы. Провизор 24. URL: https://provisor24.ru/blog/zhidkie-lekarstvennye-formy.
28. РУКОВОДСТВО ПО ВАЛИДАЦИИ И ВЕРИФИКАЦИИ МЕТОДОВ. Akkred.uz. URL: https://akkred.uz/wp-content/uploads/2022/02/OZR_12_Руководство-по-валидации-и-верификации-методов_2022.pdf.