Изолированные культуры клеток животных как альтернатива в доклинических исследованиях лекарственных средств: научные, этические и гуманитарные аспекты

Ежегодно в мире в научных экспериментах задействовано более 100 миллионов лабораторных животных. Эти шокирующие цифры не только вызывают серьезные этические вопросы, но и подчеркивают острую необходимость поиска и внедрения альтернативных методов, способных обеспечить научный прогресс без причинения страданий живым существам. В контексте разработки новых лекарственных препаратов доклинические исследования играют ключевую роль, выступая первым и критически важным этапом в оценке безопасности и эффективности потенциальных терапевтических средств до их применения на человеке. Традиционно эти исследования в значительной степени опирались на эксперименты in vivo, но возрастающее осознание этических проблем и стремление к повышению релевантности моделей для человека стимулируют активное развитие и внедрение изолированных культур клеток животных как перспективной альтернативы.

Использование изолированных культур клеток, или in vitro моделей, открывает новые горизонты в фармакологии, токсикологии и клеточной биологии, предлагая контролируемую среду для изучения сложных биологических процессов и реакции на лекарственные воздействия. Эти методы способны не только сократить, но и в ряде случаев полностью заменить использование животных, отвечая требованиям принципов биоэтики и гуманного обращения.

Целью настоящей курсовой работы является всесторонний анализ научных, этических и гуманитарных аспектов применения изолированных культур клеток животных как альтернативного метода в экспериментальных доклинических исследованиях лекарственных средств. Для достижения этой цели в работе будут последовательно решены следующие задачи:

• Рассмотрение истории развития этических норм и регулирования использования животных в экспериментах, а также концепции принципа «3R».
• Анализ основных научных методов, основанных на изолированных культурах клеток животных, используемых в доклинических исследованиях лекарственных средств.
• Определение преимуществ и ограничений использования изолированных культур клеток животных по сравнению с исследованиями на целых организмах.
• Исследование этических дилемм, возникающих при проведении экспериментальных исследований лекарственных средств с использованием животных, и способов их решения современными регуляторными органами.
• Изучение гуманитарных аспектов использования клеточных культур как альтернативы и их влияния на общественное восприятие научных исследований.
• Оценка перспектив развития и внедрения in vitro моделей для снижения зависимости от животных в экспериментальной фармакологии.

Структура работы построена таким образом, чтобы последовательно раскрыть эти аспекты, начиная с исторических предпосылок и базовых определений, переходя к детальному анализу этических принципов и современных in vitro методов, затем к сравнительному анализу моделей и, наконец, к обсуждению гуманитарных аспектов и будущих перспектив. Это позволяет читателю получить полное представление о проблеме и возможных путях ее решения.

История развития доклинических исследований и этических норм

Доклинические исследования и клеточные культуры: базовые определения

Путешествие каждого нового лекарственного препарата к пациенту начинается задолго до его появления на аптечных полках. Первый и один из наиболее ответственных этапов этого пути — доклинические исследования. Это серия экспериментальных исследований, проводимых в лабораторных условиях до начала клинических испытаний на людях. Их главная цель — всесторонне оценить безопасность и потенциальную эффективность нового медицинского продукта, будь то лекарственное средство, медицинское устройство или метод лечения. В ходе доклинических исследований определяется множество параметров, включая общую и хроническую токсичность, фармакокинетику (как препарат движется по организму), фармакодинамику (как он действует на организм), а также специфическую токсичность, такую как мутагенность (способность вызывать изменения в ДНК), канцерогенность (способность вызывать рак), тератогенность (способность вызывать пороки развития плода), аллергенность и иммунотоксичность. Таким образом, доклинические исследования служат своего рода «фильтром», отсеивая наиболее опасные и неперспективные концепции до того, как они достигнут стадии тестирования на пациентах.

Параллельно с развитием доклинических исследований, особенно активно в последние десятилетия, развиваются и альтернативные методы, такие как использование изолированных культур клеток. Что же это такое? Процесс выращивания клеток и тканей на искусственных питательных средах в стерильных условиях, то есть in vitro (от лат. «в стекле»), называется методом получения культуры изолированных тканей. Клеточная культура, в свою очередь, представляет собой колонии клеток (обычно животного или человека, принадлежащих одной ткани), которые выращиваются в контролируемых условиях — в пластиковых флаконах, планшетах или чашках Петри, при строго заданной температуре, влажности и уровне углекислого газа, в специальной питательной среде. Изолированные культуры тканей чаще всего представлены каллусными и реже опухолевыми тканями, а их успешное культивирование требует многокомпонентных питательных сред, имитирующих физиологические условия. Эти методы позволяют исследователям получать ценную информацию о действии веществ на клеточном уровне, минуя сложности и этические дилеммы, связанные с экспериментами на целых организмах, и значительно ускоряя процесс разработки.

Эволюция отношения к экспериментам на животных

История использования животных в медицинских экспериментах уходит корнями в глубокую античность. Уже древнегреческие философы, такие как Аристотель (384–322 гг. до н.э.), и знаменитый врач Гален (около 129 – около 216 гг. н.э.), а позднее арабский ученый Ибн Зухр (1091–1161 гг.), прибегали к вивисекции — вскрытию живых организмов — для изучения анатомии и физиологии. Обезьяны и свиньи часто становились объектами таких исследований, поскольку их анатомия считалась наиболее схожей с человеческой. Однако уже тогда звучали голоса несогласных: Теофраст, ученик Аристотеля, выступал против вивисекции, указывая на способность животных чувствовать боль, подобно людям. Тем не менее, преобладающая греческая философия, рассматривавшая животных как низшую форму жизни, лишенную способности к мышлению, нашла свое продолжение в христианской традиции, которая ставила жизнь человека выше жизни животных.

Эпоха Возрождения (XIV–XVI вв.) ознаменовалась новым этапом в изучении человеческого организма — вскрытием человеческих трупов, что, однако, не отменило практику экспериментов на животных. Наиболее мрачный период в истории таких исследований пришелся на время до середины XIX века. До открытия обезболивающих средств, таких как эфир (впервые публично продемонстрированный Уильямом Мортоном 16 октября 1846 года в Бостоне), животные подвергались невообразимым страданиям: их сжигали, отравляли, разрезали без какой-либо анестезии. Только в начале XIX века эксперименты на животных стали массово распространяться в интересах развития науки.

Переломный момент в отношении к животным на государственном уровне наступил в 1824 году, когда в Лондоне было создано Общество по предотвращению жестокого обращения с животными (SPCA), которое впоследствии, в 1840 году, получило королевский статус и стало называться Королевским обществом по предотвращению жестокого обращения с животными (RSPCA). Эта организация стала пионером в борьбе за права животных, заложив основу для современного законодательства. В 1870-е годы в Англии появились первые законодательные ограничения на эксперименты: 15 августа 1876 года был принят Закон о жестоком обращении с животными (Cruelty to Animals Act 1876), который стал первым в мире законодательным актом, регулирующим использование живых животных в научных исследованиях.

На протяжении многих веков лабораторные животные оставались краеугольным камнем биомедицинских исследований, но XX век принес революционные изменения и в эту область. В 1954 году Томас Уэллер и Фредерик Роббинс были удостоены Нобелевской премии за свое открытие: способность вируса полиомиелита расти в культурах различных типов тканей. Это достижение стало поворотным моментом, показав, что культура человеческих тканей может решать многие проблемы вирусологии, которые ранее были неразрешимы из-за отсутствия восприимчивых лабораторных животных. Таким образом, клеточные культуры начали свой путь как мощная альтернатива, предвещая новую эру в научных исследованиях.

Этические принципы и регулирование использования животных: Концепция «3R»

Биоэтика и ее роль в исследованиях на животных

В условиях стремительного развития биомедицинских технологий и растущего общественного внимания к вопросам гуманности, биоэтика стала неотъемлемой частью научных исследований, особенно тех, что затрагивают использование лабораторных животных. Биоэтика — это область знаний, изучающая моральные аспекты биологии и медицины. В контексте исследований с участием лабораторных животных, она определяет допустимые действия по отношению к животному с точки зрения этики научных исследований, ставя задачу минимизации негативного воздействия экспериментов, включая исключение ненужных страданий или мучительной смерти.

Философские концепции играют фундаментальную роль в формировании этических норм. Две из них особенно актуальны:

• Утилитаризм: Этот подход предполагает, что правильным действием является то, которое максимизирует общее благо или минимизирует вред. В контексте экспериментов на животных утилитаризм может оправдывать использование животных, если потенциальная польза для человечества (например, разработка жизненно важного лекарства) перевешивает страдания, причиняемые животным. Однако утилитаризм также требует, чтобы эти страдания были сведены к абсолютному минимуму, а альтернативы, если они существуют, были бы предпочтительнее.
• Деонтология: Этот подход фокусируется на моральных обязанностях и правилах, независимо от последствий. Деонтологический взгляд может утверждать, что животные имеют определенные права, и причинение им страданий само по себе является неправильным, независимо от того, насколько велика потенциальная выгода. Этот подход часто лежит в основе аргументов против использования животных в принципе или в пользу строжайшего соблюдения правил, защищающих их благополучие.

Современная биоэтика стремится найти баланс между этими двумя подходами, признавая как ценность научного прогресса для человечества, так и необходимость защиты благополучия животных. Она способствует формированию высоких моральных принципов у исследователей и врачей, что отражено в «Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных».

Принцип «3R» (Replacement, Reduction, Refinement) как международный стандарт

В поисках этичного и эффективного пути для научных исследований, в 1959 году Рассел и Берч в своем трактате «Принципы гуманной методики эксперимента» предложили концепцию, которая стала краеугольным камнем современной биоэтики в исследованиях на животных — Принципы 3R: Replacement (Замена), Reduction (Сокращение), Refinement (Усовершенствование). Эта концепция быстро получила всемирное признание и стала общепринятым мировым стандартом, способствовавшим значительному сокращению количества используемых лабораторных животных и стимулировавшим создание альтернативных методов.

Давайте рассмотрим каждый из принципов более детально:

1. Замена (Replacement): Этот принцип призывает к полному отказу от использования животных, если это возможно. Он означает поиск и внедрение альтернативных методов, которые не требуют участия живых организмов. Примеры включают использование клеточных культур, тканеинженерных моделей, компьютерного моделирования (in silico), а также беспозвоночных, микроорганизмов или даже человеческих тканей (полученных с согласия доноров). Полная замена животных в эксперименте пока маловероятна для всех типов исследований, но разработка альтернативных моделей является биоэтически привлекательной идеей и активно поддерживается.
2. Сокращение (Reduction): Если полное замещение невозможно, этот принцип требует минимизации числа используемых животных до абсолютного минимума, необходимого для получения научно достоверных и статистически обоснованных результатов. Это может быть достигнуто за счет улучшения дизайна экспериментов, использования более эффективных статистических методов, совместного использования данных или получения больше сведений от того же количества животных.
3. Усовершенствование (Refinement): Этот принцип направлен на улучшение способов проведения экспериментов таким образом, чтобы минимизировать страдания, дискомфорт и боль животных. Усовершенствование охватывает все этапы жизни животного в лаборатории — от рождения до гуманной эвтаназии. Это включает использование обезболивающих препаратов, нетравматических методов, улучшение условий содержания, обогащение среды обитания и применение наименее инвазивных процедур. Цель — обеспечить животным максимально возможное благополучие в условиях эксперимента.

Приверженность принципам 3R закреплена в международном законодательстве. Ярким примером является Директива 2010/63/EU Европейского парламента и Совета от 22 сентября 2010 года о защите животных, используемых в научных целях. Согласно этой директиве, любой исследователь, планирующий использовать животных, обязан доказать отсутствие альтернатив и принять все меры для минимизации числа и страданий животных. Специалисты, проводящие доклинические исследования, должны строго руководствоваться принципами гуманности и ненанесения вреда. Общепризнано, что такие исследования должны проводиться с соблюдением определенных нравственных норм, а использование бездомных животных для экспериментов категорически противоречит принципам биоэтики. Опыты на животных должны проводиться только квалифицированными исследователями, знающими и придерживающимися правил биоэтики.

Регулирование доклинических исследований и этика в Российской Федерации

Развитие этических норм и законодательства в области использования животных в научных исследованиях в России имеет свою специфику, отличающуюся от западных стран. В Европе первые законодательные акты, защищающие животных, появились в начале XX века, заложив основу для сложной и многоуровневой системы регулирования. В развитых странах действуют продуманные механизмы реализации гуманных законов, тогда как в России вопрос законодательного урегулирования обращения с животными, особенно в научной сфере, до сих пор стоит достаточно остро, и действенная система контроля и наказания за нарушения правил пока формируется.

В декабре 2018 года в России вступил в силу Федеральный закон № 498-ФЗ «Об ответственном обращении с животными», который стал важным шагом в защите прав животных. Однако этот закон, хоть и регулирует общие аспекты обращения с животными, не содержит статей, детально определяющих правила их использования в научных и исследовательских целях.

Тем не менее, российская наука активно интегрируется в международное биоэтическое пространство. Российским научным фондом (РНФ) разработан и рекомендован этический стандарт обращения с лабораторными животными, который приветствуется экспертными советами РНФ при рассмотрении заявок на гранты. В основу этого стандарта положены международные этические принципы, включая уже упомянутый принцип 3R. Научные группы, претендующие на грант РНФ, обязаны подробно описывать цели экспериментов, количество животных и меры для минимизации их страданий. Инициатором движения за гуманное использование животных в России был Национальный комитет по биоэтике РАН, что способствовало внедрению западных стандартов и подписанию международных конвенций и деклараций.

Работа с лабораторными животными в России разрешена исключительно для экспериментов, направленных на сохранение человеческого здоровья и жизни, и строго регламентируется законами, запрещающими причинять животным дополнительные страдания, не оправданные научной необходимостью. Ключевые нормативные акты, регулирующие содержание и использование лабораторных животных, включают:

• ГОСТ 33215–2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила оборудования помещений и организации процедур».
• ГОСТ 33216–2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторными грызунами и кроликами».
• СанПиН 2.2.1.3218–14 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев)».

Эти документы детализируют требования к условиям содержания, питанию, ветеринарному обслуживанию и процедурам работы с животными. Также важную роль играют Приказ Министерств�� здравоохранения РФ от 01.04.2016 г. № 199н «Об утверждении Правил надлежащей лабораторной практики» (GLP) и аналогичные национальные и межгосударственные стандарты (ГОСТ 53434-2009, ГОСТ 33044-2014, а также «Правила надлежащей лабораторной практики Евразийского экономического союза»). Эти нормативные акты впервые ввели термин «биологические тест-системы» животного и растительного происхождения, установив требования к ним и отразив принципы гуманного обращения.

Согласно статье 20 Модельного закона «Об обращении с животными», принятого Межпарламентской Ассамблеей государств — участников СНГ (Постановление № 29-17 от 31 октября 2007 года), использовать лабораторных животных допустимо только при отсутствии возможности проведения эксперимента, тестирования или учебной демонстрации без их участия. Оперативное вмешательство в организм подопытных животных разрешено только с использованием официально зарегистрированных обезболивающих препаратов. Запрещается использование животного для болезненных процедур более чем один раз, за исключением определенных случаев (контроль биологических препаратов, животные-доноры, изучение схем иммунизации).

Международные рекомендации также играют значительную роль. В 1985 году Совет международных медицинских научных организаций (СМННО) опубликовал «Международные руководящие принципы биомедицинских исследований с использованием животных», которые особо подчеркивают запрет на проведение острых опытов на животных без наркоза и недопустимость оправдания отступлений от этого правила «исключительно учебно-демонстрационными целями».

Интересно отметить, что в России Приказ Министерства высшего и среднего специального образования СССР № 742 от 13.11.1984 г. («Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных») до сих пор остается одним из ключевых документов, регулирующих использование животных в учебном процессе, в отсутствие прямого современного федерального законодательного акта, полностью заменяющего его в данной сфере. Этот документ также настаивает на использовании альтернативных методов при их наличии.

Несмотря на эти усилия, существуют и нерешенные проблемы. В Российской Федерации отсутствует обязательное лицензирование экспериментов с участием животных и система их регистрации. Хотя этическая оценка, часто проводимая комитетами по этике, требуется для получения грантов или публикаций в международных журналах, ее воплощение может сталкиваться с трудностями, включая неясные условия и стандарты, недостаточное управление и потенциальный конфликт интересов членов комитетов. Использование животных в учебном процессе, хотя и проводится под наблюдением специалиста-преподавателя, также требует дальнейшей стандартизации и контроля.

Важно также помнить, что Нюрнбергский кодекс, разработанный в августе 1947 года, после завершения Нюрнбергского процесса над нацистскими врачами, является основополагающим документом в этике медицинских исследований. Он требует, чтобы любые эксперименты над человеком начинались только после проведения экспериментов над животными, что подчеркивает не только важность доклинических исследований, но и их место в строгой иерархии безопасности.

Современные методы in vitro в доклинических исследованиях

Классические клеточные культуры и их применение

Внедрение клеточных технологий в практику экспериментальных исследований стало одним из наиболее актуальных направлений современной токсикологии и фармакологии. Классические клеточные культуры, представляющие собой клетки, выращенные в контролируемых лабораторных условиях, рассматриваются как универсальные модели для изучения различных видов воздействия на клеточном уровне. Они делятся на два основных типа:

1. Первичные культуры клеток: Это клетки, непосредственно выделенные из тканей живого организма (например, животных или человека) и культивируемые in vitro. Их главное преимущество заключается в том, что они наилучшим образом сохраняют морфологические и функциональные характеристики, которыми обладали in vivo. Это позволяет получать наиболее релевантные данные, особенно при работе с человеческими клетками, поскольку они отражают более точную реакцию на исследуемые соединения. Однако первичные культуры обладают рядом недостатков: они трудоемки в подготовке, требуют продвинутых навыков культивирования, имеют ограниченную продолжительность жизни и со временем могут изменять свою морфологию и функциональные особенности, а также подвержены контаминации. Методы сортировки клеток, такие как центрифугирование, проточная цитометрия и магнитная сепарация, используются для выделения специфических популяций клеток из сложных тканевых образцов, что является критически важным для получения чистых первичных культур.
2. Перевиваемые (иммортализованные) клеточные линии: Это культуры клеток, которые в результате спонтанных мутаций или искусственной трансформации (например, путем введения онкогенов) приобретают способность к неограниченному делению in vitro. Их преимущества включают простоту культивирования, высокую воспроизводимость и неограниченную доступность. Однако они могут утрачивать некоторые специфические функции и морфологические особенности, характерные для исходной ткани in vivo, что иногда снижает их физиологическую релевантность. Тем не менее, их стандартизация и возможность массового производства делают их незаменимыми для высокопроизводительного скрининга лекарственных средств.

Клеточные культуры широко применяются для изучения механизмов действия лекарств, оценки цитотоксичности, генотоксичности, исследования процессов клеточной пролиферации, дифференцировки и апоптоза. Они позволяют исследователям контролировать внешние условия и воздействовать изолированными стимулами, что значительно упрощает анализ молекулярных механизмов.

Инновационные трехмерные модели и микрофлюидные системы

Несмотря на все преимущества, классические двумерные клеточные культуры имеют существенные ограничения: они не способны полностью воспроизвести сложную трехмерную архитектуру и межклеточные взаимодействия, характерные для живых тканей и органов. Это привело к активному развитию инновационных трехмерных моделей и микрофлюидных систем.

1. Органоиды: Это настоящий прорыв в клеточной биологии, получивший широкое развитие с начала 2010-х годов. Органоиды — это трехмерные клеточные структуры, моделирующие функции человеческих органов, созданные из стволовых клеток взрослого человека. Они способны самоорганизовываться и формировать структуры, имитирующие различные ткани, включая кишечные (созданы группой Ханса Клеверса в 2009-2010 годах) и церебральные (созданы Мэдлин Ланкастер в 2013 году) органоиды. Органоиды почек человека, например, уже могут быть произведены в больших масштабах и даже соединены с живыми почками свиньи, подключенными к перфузионным аппаратам, что открывает перспективы для клеточных вмешательств в контролируемых условиях и долгосрочной цели регенерации органов перед трансплантацией. Использование органоидов вместо животных моделей в доклинических исследованиях может значительно ускорить процесс и повысить эффективность разработки лекарств.
2. «Орган-на-чипе» (organ-on-a-chip) и микрофлюидные устройства (МФУ): Это миниатюрные устройства, имитирующие физиологические функции органов или систем органов на микросхеме размером с USB-флешку. Принцип их работы основан на использовании микрофлюидных технологий, позволяющих точно контролировать состояние клеточной микросреды, имитируя физиологические условия кровотока, транспорта веществ и механических воздействий. МФУ обладают преимуществами, такими как малый расход образца, высокая точность, возможность интеграции функциональных элементов для создания аналитических систем с уникальными характеристиками. Они используются для моделирования тканей печени, почек, клеток пульпы зуба, мышечной или хрящевой ткани, а также для исследования отдельных биологических объектов (клеток, бактерий) в жидкой пробе.
3. Тканеинженерные конструкции: Традиционное понимание тканевой инженерии — это реконструкция живых, функционально активных тканей и органов вне организма путем культивирования клеток на специальных субстратах (скаффолдах). В области доклинических исследований разрабатываются модельные эквиваленты, основанные на протоколах подготовки и тестирования клеточной составляющей и скаффолда-носителя. Эти конструкции могут использоваться как доклинические модели in vitro для скрининга лекарств и тестирования медицинских устройств. Они обладают преимуществами, такими как трехмерная геометрия, низкая стоимость конструирования, высокая воспроизводимость ткани и точный контроль условий выращивания, включая возможность использования человеческих клеток.

Примеры применения этих инновационных методов:

• Клеточные модели для оценки гепатотоксичности: Для изучения токсического воздействия на печень используются различные модели, включая первичные гепатоциты, бессмертные клеточные линии, гепатоцит-подобные клетки из стволовых клеток и сокультуры из гепатоцитов и непаренхиматозных клеток. Эти модели позволяют не только выявлять лекарственную гепатотоксичность, но и изучать ее механизмы.
• Эквиваленты кожи: Меланоциты используются для создания пигментированных эквивалентов кожи, которые служат моделями для изучения регуляции пигментной системы и механизмов фотозащиты. Эндотелиальные клетки применяются в исследованиях по созданию преваскуляризованного эквивалента кожи, что критически важно для имитации кровоснабжения.
• Модели гематоэнцефалического барьера (ГЭБ): Для исследований ГЭБ активно изучаются эндотелиальные клетки как отдельные единицы, а также сложные взаимосвязи между различными типами клеток в нейроваскулярной единице. Используются разнообразные in vitro модели ГЭБ, включая статические (например, система Transwell), динамические (проточные камеры, микрофлюидные устройства) и трехмерные модели, что позволяет глубже понять механизмы проникновения лекарств в мозг.

Эти достижения свидетельствуют о том, что совершенствование клеточных систем идет в направлении увеличения продолжительности жизни и функциональной сохранности клеток, а также усложнения их конфигурации и клеточного состава для максимального приближения к условиям in vivo.

Сравнительный анализ in vitro и in vivo моделей: преимущества, ограничения и перспективы замещения

Преимущества in vitro моделей

Использование изолированных культур клеток, или in vitro моделей, в доклинических исследованиях предлагает ряд значительных преимуществ, которые делают их все более привлекательной альтернативой традиционным экспериментам на животных.

Во-первых, это этические аспекты. In vitro исследования полностью соответствуют принципам 3R, особенно принципу Замены (Replacement), поскольку они позволяют избежать или значительно сократить использование животных, тем самым уменьшая их страдания. Это имеет огромное гуманитарное значение и позитивно влияет на общественное восприятие научных исследований.

Во-вторых, in vitro модели обладают высокой экономической эффективностью и сокращают время тестирования. Работа с живыми организмами сложна, дорога и длительна, требуя значительных ресурсов на содержание животных, квалифицированный персонал и специальное оборудование. Клеточные культуры, напротив, многочисленны, разнообразны, доступны и относительно просто культивируются, что позволяет проводить высокопроизводительный скрининг большого количества потенциальных лекарственных кандидатов за гораздо меньшее время и с меньшими затратами.

В-третьих, in vitro модели предоставляют уникальные возможности для изучения молекулярных механизмов. В живом организме изучать эти процессы чрезвычайно сложно из-за колоссального числа взаимосвязанных компонентов и низкого разрешения методов анализа. В клеточных культурах легко контролировать внешние условия и воздействовать изолированными стимулами, что позволяет исследователям получить принципиально новую информацию о тонких механизмах действия лекарственных средств на клеточном и молекулярном уровнях.

Наконец, при использовании человеческих клеток, in vitro модели могут обеспечить высокую релевантность для человека. Это особенно важно, учитывая, что эксперименты на человеке запрещены, а физиологические различия между животными и людьми часто приводят к проблемам с экстраполяцией результатов. Тканеинженерные модели, например, обладают преимуществами трехмерной геометрии, низкой стоимостью конструирования, высокой воспроизводимостью ткани и точным контролем условий выращивания, включая возможность использования человеческих клеток, что повышает их прогностическую ценность для человека.

Ограничения in vitro моделей

Несмотря на очевидные преимущества, in vitro модели имеют и существенные ограничения, которые не позволяют полностью отказаться от in vivo исследований. Главный недостаток — их неспособность полностью воспроизвести сложную систему органов и организма в целом. Живой организм — это высокоинтегрированная система с многочисленными взаимодействиями между клетками, тканями и органами, сложными биохимическими процессами метаболизма, иммунными реакциями, нейрогуморальной регуляцией. Клеточные культуры, даже самые продвинутые трехмерные модели или «органы на чипе», пока не могут в полной мере имитировать эту сложность.

Как следствие, возможность переноса знаний, полученных в результате модельных экспериментов, на выводы относительно целостного живого организма весьма ограничена. Например, исследование на культуре клеток печени может дать информацию о гепатотоксичности, но не сможет предсказать, как лекарство будет распределяться по всему организму, как оно будет взаимодействовать с другими органами или выводиться из организма. Исследования на искусственных тканях и культурах клеток не позволяют получить данные о реакции всего организма в целом, что не позволит в обозримом будущем полностью отказаться от проведения опытов на животных.

Преимущества и недостатки in vivo исследований

Исследования in vivo (от лат. «в живом») на целых организмах остаются незаменимыми для комплексной оценки безопасности, токсичности и эффективности кандидатов в лекарственные средства.

Преимущества in vivo исследований:

• Комплексная оценка: Они позволяют оценить действие препарата в условиях целостного организма, учитывая все системные взаимодействия: абсорбцию, распределение, метаболизм, выведение (фармакокинетику), а также системные токсические эффекты, иммунный ответ и поведенческие изменения.
• Моделирование болезней: Современные достижения в редактировании генома помогают воспроизводить человеческие болезни на животных с высокой точностью, что делает in vivo модели ценным инструментом для изучения патогенеза и тестирования новых терапий.

Недостатки in vivo исследований:

• Этические проблемы: Главный недостаток — это этические дилеммы, связанные с причинением страданий животным, несмотря на соблюдение принципов 3R. Это вызывает активные дебаты в обществе и научном сообществе.
• Ресурсоемкость: In vivo исследования чрезвычайно ресурсоемки. Они требуют значительного времени, высококвалифицированного персонала, дорогостоящего оборудования и постоянного обслуживания животных.
• Проблема переносимости результатов: Существенные физиологические различия между людьми и животными (например, в абсорбции, распределении, метаболизме и выведении лекарств) часто приводят к тому, что результаты, полученные на животных, плохо экстраполируются на человека. Стандартные доклинические исследования in vivo на лабораторных животных часто оказываются нерелевантными из-за этих видоспецифичных различий.

Перспективы полного и частичного замещения животных в доклинических исследованиях

Несмотря на заявления об уменьшении использования животных в исследованиях, общая глобальная статистика остается высокой. По оценкам систематического обзора 2015 года, 79,6 млн животных были использованы для научных целей в 37 странах, предоставивших статистику (без учета Китая), а некоторые источники предполагают, что общее число может превышать 150 млн ежегодно. Однако есть и позитивные тенденции. Например, в Европейском Союзе наблюдается снижение числа животных, впервые использованных для научных целей, с 12,0 млн в 2015 году до 9,39 млн в 2019 году. Основная часть животных (50%) используется для фундаментальных, трансляционных и прикладных исследований, 31% — для регуляторных целей (тесты на токсичность и фармакологическую безопасность), 16% — для рутинного производства (например, антител), и 3% — для образования. Эти данные показывают, что хотя путь к полному замещению долог, частичное сокращение и замещение уже происходит.

Перспективы полного и частичного замещения животных в доклинических исследованиях не просто обещающие, они уже реализуются на практике:

• Примеры успешного применения in vitro моделей:
  • Скрининг пролекарств: Для быстрого скрининга лекарственных средств, особенно пролекарств (которые становятся активными только после метаболизма в организме), необходимы in vitro системы, прогнозирующие цитотоксичность ксенобиотиков с учетом их метаболизма. В примере с циклофосфамидом, использование микрофлюидного чипа позволило наблюдать выраженную гибель клеток кератиноцитов человека при культивировании со сфероидами гепатомы, имитирующими метаболизм в печени, что является значительным шагом к более релевантному in vitro тестированию.
  • Разработка вакцин: Культуры клеток широко применяются в производстве вакцин и биотехнологических препаратов. Например, для определения наиболее безопасных прототипов вакцины от коронавирусной инфекции, ее состава, дозы и способа введения, российский научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» проводит испытания на низших приматах и хорьках, но in vitro модели используются на ранних этапах.
  • Модели для фармацевтической разработки: Разработанные in vitro модели, такие как модель носовой полости из скульптурного пластилина, успешно применяются для скрининга интраназальных фармацевтических композиций. Тест Caco-2 используется для исследования in vitro проницаемости, что является важным аспектом биовейвера.
  • Дозревание ооцитов in vitro (IVM): Это вспомогательная репродуктивная технология, которая позволяет аспирировать незрелые ооциты и дозревать их in vitro. Технология IVM имеет огромное значение для пациенток с синдромом поликистозных яичников (позволяя избежать синдрома гиперстимуляции) и пациенток с онкологическими заболеваниями (позволяя отказаться от гормональной стимуляции), демонстрируя успешное применение in vitro подходов в клинической практике. Для повышения эффективности классической IVM разработана двухступенчатая система созревания in vitro с капацитацией (CAPA-IVM).
  • Гибридные органы: Недавний прорыв — создание гибридной почки человека и свиньи. Впервые удалось соединить органоиды почек человека с живыми почками свиньи, подключенными к нормотермическим перфузионным аппаратам. Сочетание органоидных технологий и перфузии ex vivo может обеспечить клеточные вмешательства в полностью контролируемых условиях. Долгосрочная цель этого направления — регенерация или восстановление органов перед трансплантацией, что сократит время ожидания для пациентов и увеличит количество пригодных для трансплантации органов.
• Концепция «человек-на-чипе»: Это интегрированная система, которая объединяет несколько «органов-на-чипе», соединенных между собой микрофлюидными каналами, имитирующими кровеносную систему. Такая система может воспроизводить взаимодействие различных органов в организме человека, позволяя всесторонне изучать системные эффекты лекарств, их метаболизм и токсичность в условиях, максимально приближенных к физиологическим. «Человек-на-чипе» обещает стать мощным инструментом для предсказания реакции человека на новые соединения, значительно снижая потребность в животных моделях.

Совершенствование клеточных систем идет в направлении увеличения продолжительности жизни и функциональной сохранности клеток, а также усложнения их конфигурации и клеточного состава для максимального приближения к условиям in vivo. Этот прогресс, в сочетании с развитием компьютерного моделирования и методов искусственного интеллекта, открывает реальные перспективы для постепенного, но значительного снижения зависимости от животных в экспериментальной фармакологии и, возможно, их полного замещения в некоторых областях.

Гуманитарные аспекты и общественное восприятие альтернативных методов

Общественное отношение к использованию животных в науке

Вопрос использования животных в научных экспериментах всегда вызывал и продолжает вызывать горячие споры в обществе. Это не просто научная или этическая проблема, но и глубокий гуманитарный аспект, затрагивающий моральные, этические и даже религиозные представления о допустимости использования живых существ для научных целей.

Существуют, по сути, два основных подхода к необходимости использования животных:

1. Традиционный подход: Сторонники этого подхода утверждают, что эксперименты на животных абсолютно необходимы для развития науки, медицины и фармакологии. Они подчеркивают, что многие жизненно важные открытия, вакцины и лекарства стали возможными только благодаря исследованиям in vivo. Для них животные — это незаменимые биологические модели, позволяющие понять сложные процессы, происходящие в целостном организме, и оценить безопасность новых препаратов перед их применением на человеке.
2. Подход защитников животных: Эта позиция радикально отличается, утверждая, что эксперименты на животных не только этически неприемлемы из-за страданий, причиняемых живым существам, но зачастую и не дают достоверной информации. Они указывают на видоспецифичные различия между животными и человеком, которые могут привести к неверным выводам, и настаивают на полном прекращении таких экспериментов в пользу альтернативных методов.

Между этими двумя полюсами находится широкий спектр мнений. Исследования, подобные тем, что проводились среди жителей Перми, показывают интересный сдвиг в сознании общества. С одной стороны, наблюдается растущая тенденция к гуманизации и формированию ответственного отношения к животным, что проявляется в неприятии жестоких и насильственных методов. С другой стороны, традиционные представления все еще сильны, и часть респондентов, даже в современном обществе, может одобрять эксплуатацию животных, если она воспринимается как необходимая для научного прогресса или благополучия человека.

Эксперимент с использованием лабораторных животных, безусловно, остается одним из ведущих методов познания в современной медицине, фармакологии, ветеринарии и биологии. Однако растущее общественное внимание и развитие биоэтики требуют постоянного пересмотра подходов и поиска компромиссов, которые бы уравновешивали научные потребности с этическими обязательствами.

Влияние альтернативных методов на этику исследований и общественное доверие

Внедрение и развитие альтернативных методов, основанных на клеточных культурах, органоидах и «органах-на-чипе», оказывает глубокое влияние не только на методологию исследований, но и на этику науки, а также на общественное доверие к ней.

1. Повышение этичности научных исследований: Главное и наиболее очевидное влияние — это повышение этичности научных исследований через активное внедрение принципов 3R. Каждый раз, когда in vitro модель позволяет сократить или заменить эксперимент на животном, это шаг к более гуманной науке. Это не просто соблюдение формальных правил, а реальное снижение страданий живых существ, что соответствует базовым моральным ценностям человечества. Такой подход формирует более ответственное и этичное научное сообщество.
2. Формирование высоких моральных принципов у специалистов: Исследователи, активно использующие альтернативные методы, не только развивают новые навыки, но и воспитывают в себе более глубокое уважение к жизни. Приверженность принципам 3R способствует формированию высоких моральных принципов у будущих врачей и ученых, что является критически важным для профессии, связанной с благополучием живых существ. Это также помогает избежать морального стресса, который могут испытывать исследователи, вынужденные проводить болезненные процедуры на животных.
3. Позитивное влияние на общественное восприятие науки и фармакологии: Общество становится все более осведомленным и чувствительным к вопросам защиты животных. Новости о жестоком обращении с животными в научных лабораториях могут подорвать доверие к науке и вызвать негативную реакцию. Напротив, демонстрация усилий по сокращению и замещению животных в исследованиях, активное внедрение in vitro технологий, открытость в этом вопросе — все это значительно улучшает общественное восприятие науки и фармакологии. Это позволяет науке сохранять свой авторитет и получать поддержку общества, которая необходима для дальнейшего прогресса. Когда люди видят, что ученые активно ищут гуманные альтернативы, это укрепляет их веру в этичность и ответственность научного сообщества.

Таким образом, развитие и внедрение изолированных культур клеток животных как альтернативных методов не только способствует научному прогрессу, но и является мощным инструментом для формирования более гуманной и этически ответственной науки, что, в свою очередь, укрепляет доверие общества к исследовательским усилиям.

Заключение

Исследование изоляции культур клеток животных как альтернативного метода в доклинических исследованиях лекарственных средств выявило глубокий симбиоз научного прогресса, этических императивов и гуманитарных ценностей. Глобальная проблема этичности использования животных в научных экспериментах, подкрепленная статистикой о сотнях миллионов лабораторных животных, задействованных ежегодно, подчеркивает критическую актуальность поиска и внедрения альтернативных подходов.

Наше исследование показало, что изолированные культуры клеток животных – от классических двумерных моделей до инновационных органоидов и систем «орган-на-чипе» – представляют собой не просто техническую замену, но и мощные новаторские системы, способствующие более глубокому пониманию биологических процессов и более точной оценке эффективности и безопасности лекарственных препаратов. Исторический экскурс от вивисекции античности до Нобелевской премии за культивирование полиомиелита в тканевых культурах демонстрирует долгий путь развития как научных методов, так и этического сознания.

В центре этого этического ландшафта находится принцип «3R» (Replacement, Reduction, Refinement), разработанный Расселом и Берчем в 1959 году. Он стал не просто рекомендацией, а международным стандартом, закрепленным в директивах Европейского Союза и активно внедряемым в национальные нормативно-правовые акты. В России, несмотря на некоторые пробелы в законодательном регулировании (например, отсутствие обязательного лицензирования экспериментов), наблюдается стремление к гармонизации с международными стандартами, что подтверждается этическими стандартами Российского научного фонда и внедрением правил надлежащей лабораторной практики.

Сравнительный анализ in vitro и in vivo моделей четко обозначил преимущества клеточных культур: этичность, экономическая эффективность, сокращение времени тестирования, возможность изучения молекулярных механизмов и потенциально высокая релевантность для человека. В то же время, признаются ограничения in vitro моделей, связанные с их неспособностью полностью воспроизвести сложность целостного организма и межорганные взаимодействия. Именно поэтому in vivo исследования пока остаются незаменимыми для комплексной оценки системных эффектов, несмотря на их этические дилеммы, ресурсоемкость и проблемы с экстраполяцией результатов на человека.

Однако перспективы частичного и даже полного замещения животных моделей становятся все более осязаемыми. Примеры успешного применения in vitro моделей в скрининге пролекарств, разработке вакцин, фармацевтической разработке in situ систем, дозревании ооцитов in vitro (IVM) и даже в создании гибридных органов (органоидов почек человека, соединенных с почками свиньи) демонстрируют реальный прогресс. Концепция «человек-на-чипе» обещает революционизировать доклинические исследования, создавая интегрированные системы для всестороннего изучения здоровья человека.

Гуманитарные аспекты и общественное восприятие играют решающую роль. Сдвиг в сознании общества в сторону гуманизации и ответственного отношения к животным заставляет научное сообщество переосмысливать свои подходы. Внедрение альтернативных методов не только повышает этичность исследований и способствует формированию высоких моральных принципов у специалистов, но и укрепляет общественное доверие к науке.

В заключение, изолированные культуры клеток животных являются не просто эффективной альтернативой в доклинических исследованиях, но и символом эволюции научного мышления, где инновации идут рука об руку с этической ответственностью. Дальнейшее развитие и внедрение in vitro технологий, гармонизация российского законодательства с международными стандартами биоэтики и усиление контроля за экспериментами на животных станут ключевыми шагами на пути к более гуманной, эффективной и социально ответственной науке.

Список использованной литературы

1. Байбурин А.К., Топорков А.Л. У истоков этики. Ленинград, 1990.
2. Вернадский В. И. Живое вещество и ноосфера. Москва: Наука, 2007. С. 64.
3. Фрайер Ф. Г. Картина жизни. Москва: Наука, 2006. С. 54.
4. Гусейнов А.А. Великие моралисты. Москва: Республика, 1995.
5. Швейцер А. Упадок и возрождение культуры. Избранное. Москва: Прометей, 1993.
6. Regnier J-F., Imbert С. Contributions of physicochemical properties to the evaluation of ocular irritation // ATLA. 1992. V.20. P. 457-465.
7. Regnier J-F., Imbert С, Boutonnet J-C. Evaluation of the EYTEXR system as a screening method for the ocular irritancy of chemical products // ATLA. 1994. V.22. P.32-51.
8. Singer P. Animal liberation. NY.: Avon Books, 1977.
9. A critical look at animal experimentation. NY.: Medical Research Modernization Committee, 1992.
10. Aping science: a critical analysis of research at the Yerkes regional primate research center. NY.: Medical Research Modernization Committee, 1995.
11. Cohen M.D. and Young C. «Alcoholic» rats (and other alcohol research using animals) (a critique). National research information center, American, New England and National antivivisection societies, 1989.
12. Sharpe R. Science on trial. The human cost of animal experiments. Sheffield: Awareness Publishing Ltd., 1994.
13. Smyth D.H. Alternatives to animal experiments. London: Scolar press in association with the research defence society, 1978.
14. Rowan A.N. Of mice, models and men — a critical evaluation of animal research. Albany: State university of New York Press, 1984.
15. Stephens M.L. The significance of alternative techniques in biomedical research: An analysis of Nobel Prize awards. In Advances in animal welfare science, edited by M.W.Fox and L/D/ Mickley: Boston: Martinus Nijhoff, 1987.
16. Power Point презентация: David Dewhurst, Impact of animal studies and alternatives on learning/University of Edinburgh.
17. Адамс Р. Методы культуры клеток для биохимиков. Москва: Мир, 1983. 263 с.
18. Шмидт Р., Тевс Г. Физиология человека. Москва: Мир, 1996. 323 с.
19. Покровский В. М., Коротько Г. Ф., Кобрин В. И. и др. Физиология человека. Москва: Медицина, 1997. 448 с.
20. Розен В.Б. Основы эндокринологии. Москва: Изд-во МГУ, 1994. 384 с.
21. Лопухин Ю.М., Гусев С. А. Журнал «Ремедиум». 2005. №9.
22. Врачи, пациенты, общество. Права человека и профессиональная ответственность врача в документах международных организаций. Киев, 1999.
23. Бащинский С.Е. Разработка клинических практических руководств с позиций доказательной медицины. Москва: Медиа Сфера, 2004. 135 с.
24. Власов В.В. Vioxx и далее // Международный журнал медицинской практики. 2005. №2. С. 4-6.
25. Кэмпбелл А., Джиллет Г., Джонс Г. Медицинская этика. Под ред. Ю.М. Лопухина, Б.Г. Юдина. Москва: ГЭОТАР-МЕД, 2004. 400 с.
26. Уильямс Дж. Р. Руководство по медицинской этике. Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2006. 128 c.
27. Профессиональная этика врача ветеринарной медицины / под ред. И.С. Панько. Санкт-Петербург, Москва, Краснодар: Лань, 2004.
28. О гуманном обращении с животными | Гриниум | 2023. URL: https://www.grinium.ru/articles/o-gummanom-obrashenii-s-zhivotnymi/
29. Биотех.: Понятие культуры изолированных клеток и тканей | Биотех. URL: https://biotech.by/kultury-tkanej/ponyatie-kultury-izolirovannykh-kleto.html
30. Доклинические испытания | EUPATI Toolbox. URL: https://www.eupati.eu/glossary/doklinicheskie-ispytaniya/
31. Принципы 3R | PharmAdvisor. URL: https://pharmadvisor.ru/glossary/3r-principles/
32. Этические нормы использования животных в биомедицинских исследованиях. URL: https://gigabaza.ru/doc/81694.html
33. Альтернативы | Воронежский государственный университет. URL: https://www.vsu.ru/russian/science/bioethics/alternatives.html
34. Этический стандарт обращения с лабораторными животными | Кубанский государственный медицинский университет | 2022. URL: https://ksma.ru/nauka/nauchnaya-etika/eticheskiy-standart-obrashcheniya-s-laboratornymi-zhivotnymi/
35. Эксперименты над животными — все самое интересное на ПостНауке | PostNauka | 2017. URL: https://postnauka.ru/faq/77332
36. Законодательство, регламентирующее работу с лабораторными животными | БиоПитомник СТЕЗАР. URL: https://bio-st.ru/articles/zakonodatelstvo-reglamentiruyushhee-rabotu-s-laboratornymi-zhivotnymi/
37. Международные и российские рекомендации | Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова. URL: http://www.bioethics.ru/upload/iblock/c34/c34d88e404fc9a959141f27464010b42.pdf
38. Ловчикова С. А. БИОЭТИЧЕСКИЕ ПРОБЛЕМЫ ЭКСПЕРИМЕНТИРОВАНИЯ НА ЖИВОТНЫХ В ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ // КиберЛенинка. 2020. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/bioeticheskie-problemy-eksperimentirovaniya-na-zhivotnyh-v-issledovatelskoy-deyatelnosti
39. Денисов А. В., Чепракова В. А., Анисин А. В., Безруков С. И. Этические аспекты использования животных в современных экспериментальных исследованиях // Вестник Российской военно-медицинской академии. 2018. Т. 20, № 3. С. 238-242. URL: https://www.vmeda.org/wp-content/uploads/2019/06/Vestnik_2018_3.pdf
40. 12 методов в картинках: клеточные технологии | Биомолекула | 2017. URL: https://biomolecula.ru/articles/12-metodov-v-kartinkakh-kletochnye-tekhnologii
41. Тканевая инженерия и что она может предложить сегодня | Биомолекула | 2024. URL: https://biomolecula.ru/articles/tkanevaia-inzheneriia-i-chto-ona-mozhet-predlozhit-segodnia
42. Кухтевич И. В., Букатин А. С., Мухин И. С., Евстрапов А. А. Микрофлюидные устройства для исследований клеток (обзор) // Известия СПбГЭТУ «ЛЭТИ». 2011. № 6. С. 103-109. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/mikroflyuidnye-ustroystva-dlya-issledovaniy-kletok-obzor
43. От эксперимента до индустрии: как органоиды строят мост между наукой и бизнесом | PostNauka | 2025. URL: https://postnauka.ru/longreads/103233
44. Тестирование лекарств на биоискусственных тканях | PostNauka | 2019. URL: https://postnauka.ru/longreads/97594
45. Евстрапов А. А., Кухтевич И. В., Букатин А. С. Микрофлюидные чипы для биологических и медицинских исследований // Рос. хим. ж. (Ж. Рос. хим. об-ва им. Д.И. Менделеева). 2011. Т. LV, № 2. С. 136-141. URL: http://www.chem.msu.ru/rus/jvho/2011/2/136-141.pdf
46. Клеточные культуры как перспективная биологическая модель в токсикологических исследованиях | Medline.ru | 2014. URL: http://www.medline.ru/public/art/tom15/art133.html
47. Егорихина М. Н. Модель биомедицинского клеточного продукта для доклинических исследований на крупном лабораторном животном // Вестник трансплантологии и искусственных органов. 2019. Т. 21, № 4. С. 109-115. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/model-biomeditsinskogo-kletochnogo-produkta-dlya-doklinicheskih-issledovaniy-na-krupnom-laboratornom-zhivotnom
48. Основополагающие принципы проведения исследований с участием животных | Факультет права НИУ ВШЭ | 2020. URL: https://law.hse.ru/data/2020/03/20/1557088916/%D0%9E%D1%81%D0%BD%D0%BE%D0%B2%D0%BE%D0%BF%D0%BE%D0%BB%D0%B0%D0%B3%D0%B0%D1%8E%D1%89%D0%B8%D0%B5%20%D0%BF%D1%80%D0%B8%D0%BD%D1%86%D0%B8%D0%BF%D1%8B%20%D0%BF%D1%80%D0%BE%D0%B2%D0%B5%D0%B4%D0%B5%D0%BD%D0%B8%D1%8F%20%D0%B8%D1%81%D1%81%D0%BB%D0%B5%D0%B4%D0%BE%D0%B2%D0%B0%D0%BD%D0%B8%D0%B9%20%D1%81%20%D1%83%D1%87%D0%B0%D1%81%D1%82%D0%B8%D0%B5%D0%BC%20%D0%B6%D0%B8%D0%B2%D0%BE%D1%82%D0%BD%D1%8B%D1%85.pdf
49. Прохорова С. Е., Аникина Л. В., Батаков Е. А., Лебедев Д. С., Доронина Н. В. Тканеинженерные конструкты кожи и использование стволовых клеток для создания кожных эквивалентов (обзор) // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). 2017. Т. 150, № 3. С. 13-20. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/tkaneinzhenernye-konstrukty-kozhi-i-ispolzovanie-stvolovyh-kletok-dlya-sozdaniya-kozhnyh-ekvivalentov-obzor
50. Баринов А. С. Этические принципы при работе с лабораторными животными // Известия ОГАУ. 2015. № 1 (51). С. 20-23. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/eticheskie-printsipy-pri-rabote-s-laboratornymi-zhivotnymi
51. Лабораторные животные в научных исследованиях | Институт радиобиологии НАН Беларуси | 2017. URL: https://www.irb.by/publication/laboratornye-zhivotnye-v-nauchnykh-issledovaniyakh/
52. Создана первая гибридная почка человека и свиньи | Научная Россия | 2025. URL: https://scientificrussia.ru/articles/sozdana-pervaya-gibridnaya-pochka-cheloveka-i-svini
53. Tang C. In vitro vs. In vivo: Is One Better? // UHN Research. 2019. URL: https://www.uhn.ca/research/news/In_vitro_vs_In_vivo_Is_One_Better
54. Ахапкина Е. А., Ванькова А. С., Вахнин И. А. и др. Микрофлюидный чип как инструмент для эффективной оценки токсичности пролекарства циклофосфамида in vitro // Клеточные технологии в биологии и медицине. 2022. № 1. С. 39-44. URL: https://www.elibrary.ru/item.asp?id=48425715
55. Клещевников А. М., Гарифуллина Г. Г., Каримова Л. А. Микрофлюидные устройства, адаптированные для культивирования стволовых клеток (обзор) // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2018. Т. 21, № 8. С. 3-8. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/mikroflyuidnye-ustroystva-adaptirovannye-dlya-kultivirovaniya-stvolovyh-kletok-obzor
56. Кононенко М., Смирнов В. Лекарство в пробирке: доклинические исследования in vitro // Биомолекула. 2021. URL: https://biomolecula.ru/articles/lekarstvo-v-probirke-doklinicheskie-issledovaniia-in-vitro
57. Суслина С. Н., Татевосян Р. Р., Будаева К. О. и др. Применение in vitro моделирования для проведения фармацевтической разработки in situ систем // Известия высших учебных заведений. Серия: Химия и химическая технология. 2022. Т. 65, № 6. С. 100-107. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/primenenie-in-vitro-modelirovaniya-dlya-provedeniya-farmatsevticheskoy-razrabotki-in-situ-sistem
58. Евразийская экономическая комиссия. Доклинические исследования ветеринарных лекарственных препаратов в государствах-членах. URL: https://docs.eaeunion.org/docs/ru-ru/01429987/%D0%98%D0%9D%D0%A1%D0%A2-1
59. Исследование ин витро проницаемости в тесте Caco-2 для биовейвера, основанного на биофармацевтической системе классификации (БКС), тесты на растворимость, стабильность и ин витро проницаемость в модели Сасо2/Pgp | ХимРар. URL: https://chemrar.ru/services/rd-center/preclinical-studies/in-vitro-permeability-caco-2-test/
60. Мазеркина И. А. Оценка лекарственной гепатотоксичности in vitro на клеточных моделях (обзор) // Разработка и регистрация лекарственных средств. 2021. Т. 10, № 1. С. 20-27. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/otsenka-lekarstvennoy-gepatotoksichnosti-in-vitro-na-kletochnyh-modelyah-obzor
61. Саркисян К. С., Шатская А. В., Сулейманов Р. А. Модели ГЭБ in vitro: преимущества и недостатки, текущее положение и перспективы развития // Клеточные технологии в биологии и медицине. 2022. № 1. С. 52-58. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/modeli-geb-in-vitro-preimuschestva-i-nedostatki-tekuschee-polozhenie-i-perspektivy-razvitiya
62. Колесниченко М. Б., Муллин М. М. Исследование отношения к животным в социологии // Вестник Пермского университета. Философия. Психология. Социология. 2019. № 2. С. 268-278. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/issledovanie-otnosheniya-k-zhivotnym-v-sotsiologii
63. Михайлова Н. Д., Мишиева Н. Г., Кириллова А. О. и др. Дозревание ооцитов in vitro // Акушерство и Гинекология. 2021. № 9. С. 13-18. URL: https://ag.sechenov.ru/articles/dozrevanie-ootsitov-in-vitro/